[发明专利]同时检测肺炎链球菌、嗜肺军团菌和卡他莫拉菌的试剂盒

说明书

本发明涉及荧光PCR检测技术领域，尤其涉及同时检测肺炎链球菌、嗜肺军团菌和卡他莫拉菌的试剂盒。其中，荧光PCR检测体系包括肺炎链球菌、嗜肺军团菌和卡他莫拉菌的特异性保守序列的引物及TaqMan荧光探针，其DNA序列SEQ ID NO：1～9。本发明的优点在于利用多种荧光定量PCR检测技术，实现了同时检测肺炎链球菌、嗜肺军团菌和卡他莫拉菌三种呼吸道病原体的目的，该检测方法快速、准确，且保证了检测的时效性、特异性和灵敏度，在疾病监测、临床诊断等领域具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及荧光PCR检测技术领域，尤其涉及同时检测肺炎链球菌、嗜肺军团菌和卡他莫拉菌的试剂盒。

背景技术

呼吸道感染是世界范围内最常见的传染病之一，是影响人类健康的重要问题。呼吸道感染包括上呼吸道感染和下呼吸道感染，能够引起呼吸道感染的病原体很多，包括细菌、病毒、支原体、衣原体等，这些病原体引起的症状接近，依靠临床症状进行区分较为困难。下呼吸道感染是指终末气道，肺泡和肺间质的炎症，可由疾病微生物、理化因素，免疫损伤、过敏及药物所致。在多种多样的呼吸道病原体中，肺炎链球菌、嗜肺军团菌和卡他莫拉菌是三种重要的病原体：

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae，SP)属链球菌科链球菌属细菌，革兰氏阳性球菌，镜下观察一般呈双球状排列，有荚膜结构，荚膜是肺炎链球菌的主要毒力因子可引起多种感染的重要病原体。肺炎链球菌是引起细菌性肺炎的最主要病原体，约占其2/3左右，全年均可发病，冬春季高发。该菌主要通过飞沫和呼吸道分泌物传播进而引起细菌性肺炎，也可侵入机体其它部位，引起继发性胸膜炎、中耳炎、乳突炎以及心内膜炎等。目前在世界范围内，肺炎链球菌感染所导致的疾病依然是一个严重的公共卫生问题。因此对肺炎链球菌感染要尽快针对不同病情给以恰当的治疗。

嗜肺军团菌(Legionella pneumophila，LP)是一种有鞭毛上的革兰氏阴性菌，军团菌属多形态性的短小球杆菌，兼性胞内寄生菌，嗜肺军团菌为胞内寄生菌，是引起人类军团菌病的重要病原体。该菌主要通过吸入带菌飞沫而感染，常见的感染来源为污染的空调和供水系统，其感染力在抗体和血清补体存在下大大提高，可引起军团菌肺炎、肺外综合征和庞蒂亚克热。军团菌肺炎在非典型肺炎中是病情最严重的一种，未经有效治疗者的病死率高达45％。

卡他莫拉菌(MoraxellaCatarrhalis，MC)为革兰氏阴性非发酵菌。卡他莫拉菌可以引起肺炎，大多数肺部感染是通过气道途径扩散，其临床特点主要有高热、呼吸困难、脉搏加速、呼吸加快、咳痰等症状，并是儿童迁延性细菌性支气管炎的主要病原菌,对儿童健康构成威胁。有研究表明卡他莫拉菌是儿童社区获得性肺炎、上额窦炎、中耳炎以及成人慢性下呼吸道感染的第3位最常见致病菌，与肺炎链球菌,流感嗜血杆菌共同被认为是儿童呼吸道感染的最重要的三大致病菌。

现有技术针对呼吸道肺炎链球菌、嗜肺军团菌和卡他莫拉菌的检测方法主要有分离培养法、免疫检测法、血清学诊断和荧光PCR法。传统的分离不培养法需要培养分离出菌株之后才能鉴定，需要时间较长，且嗜肺军团菌生长条件苛刻，营养要求很高，费时费力，不利于快速检测，并对于操作人员来说具备一定的危险性，因而限制了其在临床的应用。免疫法检测试剂针对的是样本中的抗原或者病原体引起机体产生的特异性抗体，且抗体检测有窗口期，在发病初期容易漏诊。另外，虽然血清学方法技术成熟，有商品试剂盒供应，但是敏感性和特异性有待提高，同时，需要检测急性期和恢复期双份血清才有诊断意义且容易漏诊。而现有技术中的荧光PCR检测，因引物特异性等方面的原因，很难实现对SP、LP、MC的多重检测。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供同时检测肺炎链球菌、嗜肺军团菌和卡他莫拉菌的试剂盒，该试剂盒具有良好的灵敏性、特异性。

本发明提供了肺炎链球菌的检测引物和探针，

肺炎链球菌的正向引物，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示；

肺炎链球菌的反向引物，其核酸序列如SEQ ID NO:2所示；