[发明专利]一组检测柯萨奇病毒B组的引物和探针

说明书

本发明公开了一组检测柯萨奇病毒B组的引物和探针，本发明通过Real‑time RT‑PCR方法对肠道病毒型别进行鉴定，能够在较短时间内，准确对流行中的肠道病毒进行鉴定，对疑似感染样本进行确诊。本发明选择在相对保守区域设计引物探针，选用特异性高的引物和Taqman探针，优化了反应体系中引物和探针的浓度，实现单次检测即可对四种不同血清型的柯萨奇病毒进行分型鉴定，具有特异性强、灵敏性高、快速、操作方便、成本低廉等多种优点，适用于现场检测、早期诊断和流行病学检测研究等，对柯萨奇病毒B组感染疾病起到辅助和鉴别诊断作用。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体地，涉及一组检测柯萨奇病毒B组的引物和探针。

背景技术

柯萨奇病毒B组(coxsackieviruses B，CVB)均属于小RNA病毒科肠病毒属，共有6个家族成员，CVB1～6。它是一种大小约为30nm、核衣壳20面体立体对称、无包膜的单正链全长7.5kb左右RNA病毒。基因组仅有一个开放读码框以及2个非编码区(5'UTR和3′UTR)，开放读码框可以编码4个结构基因(VP1～VP4)和4个非结构基因(2A～2C和3A～3D)。

CVB一直在美国诊断实验室报告给CDC的最常见的15种肠道病毒列表之内，特别是在幼儿中有较高的感染发病率。虽然CVBs属于肠道类病毒并且其经粪口的传播方式，但是病毒并不会导致胃肠疾病。许多CVB感染症状是轻微的，通常只产生类似感冒的症状，但在免疫力低下的患者以及部分老人、幼儿中可引起严重疾病，比如病毒性心肌炎、肺炎、肝炎、胰腺炎和睾丸炎等。此外，CVB还能入侵中枢神经系统，能造成无菌性脑膜脑炎以及急性弛缓性麻痹，发病阶段出现发热、脑膜刺激症、头痛和畏光症等临床症状。临床诊断是根据病人临床表现并辅之与脑脊液实验室检测、脑电图、影像学CT和MRI共同评估。20世纪70年代，美国CDC上报的CVB感染临床综合症中，脑膜炎、脑炎和瘫痪分别占了56％、15％、1％。近20年来，世界范围内，均有大规模的肠道病毒暴发感染，引发神经系统病症以及脑膜脑炎的报道，并且CVB也是主要的感染源。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种检测科萨奇病毒B组的引物和探针，本发明建立了单管荧光PCR同时检测4种型别的科萨奇病毒，并应用于临床标本的检测。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

本发明针对流行中的肠道病毒的序列进行比对和分析，设计出针对不同血清型特异的引物和探针。每种病毒检测时探针上对应不同的荧光标记，通过不同的荧光通道检测相对应的病毒，以此来实现分型

因此本发明要求保护一组检测柯萨奇病毒B组的引物，其核苷酸序列如SEQ IDNO：1～8所示。

以及，一组检测柯萨奇病毒B组的探针，核苷酸序列如SEQ ID NO：9～12所示。

优选地，所述探针5’端和3’端有均标记有不同的荧光基团。

更优选地，核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示的探针，其5’端标记有荧光基团FAM，3’端标记有荧光基团BHQ1。

更优选地，核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示的探针，其5’端标记有荧光基团Cy5，3’端标记有荧光基团BHQ3。

更优选地，核苷酸序列如SEQ ID NO：11所示的探针，其5’端标记有荧光基团ROX，3’端标记有荧光基团BHQ2。

更优选地，核苷酸序列如SEQ ID NO：12所示的探针，其5’端标记有荧光基团HEX，3’端标记有荧光基团MGB。