[发明专利]用于治疗宫腔粘连的干细胞制剂

说明书

本发明涉及用于治疗宫腔粘连的干细胞制剂。该干细胞制剂中包含胎盘间充质干细胞和药用溶媒。所述胎盘间充质干细胞是通过包括如下步骤的方法制备得到的：处理胎盘小叶；用混合酶消化液振荡消化胎盘小叶，接着添FBS以终止消化；添加组织清洗液收集细胞液并洗涤细胞得到原代细胞；对原代细胞进行冻存和复苏；将P0代细胞用加完全培养基进行培养，完成从P0代至P1代的细胞传代，继续传代，得到各代间充质干细胞。所得各代胎盘间充质干细胞的细胞纯度大于90％；细胞制剂中的药用溶媒是水，该细胞制剂供注射方式使用。本发明细胞制剂具有治疗宫腔粘连的优良生物学效果。

技术领域

本发明属于生物技术和生物医药领域，涉及使用干细胞治疗宫腔粘连，促进子宫内膜修复的细胞制剂。尤其是涉及使用胎盘间充质干细胞配制成的制剂，将其用于治疗宫腔粘连的用途。

背景技术

宫腔粘连(intrauterine adhesions，IUA)又称Asherman综合征，是严重危害女性身心健康的临床常见疾病之一。任何形式的宫腔内手术操作，感染等均可引起的子宫内膜损伤，进而导致子宫内膜粘连和纤维化，宫腔部分或全部闭塞，表现为月经稀发、闭经、反复流产、不孕症等一系列临床症候。文献报道。我国不孕症的发病率6～15％，其中包括着床障碍等宫腔环境因素占全部病因学的15～31％，且有上升趋势。如何预防，逆转，修复子宫内膜损伤，是治疗宫腔粘连的关键因素。

现有的治疗手段局限，治疗效果差复发率高。临床治疗措施主要是基于粘连松解术后刺激子宫内膜再生，以及防治术后再粘连。包括雌激素疗法、宫腔内球囊、可吸收防粘连物质置放、羊膜宫腔移植等等。雌激素可刺激子宫内膜再生，加速祼露区的上皮化，覆盖子宫创面，防止新的粘连形成。因此，粘连松解术后联合使用雌激素成为主要的治疗手段，是公认的最佳治疗方案。但治疗后有效率不足30％，且复发率超过23.5％，其中20.0％～62.5％为重度粘连。因此，研究开发安全、有效的新的临床治疗方案一直是该领域的热点和难点问题。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一类具有自我复制和多向分化潜能的成体干细胞，在再生医学领域发挥着非常广泛的作用。MSCs具有多向分化潜能、抑制炎症、归巢能力、免疫原性低、来源广泛、易于分离、培养扩增和无伦理学限制等优势，成为再生医学理想的细胞来源。近年来，国内外初步研究结果显示，MSCs能修复受损子宫内膜，改善其功能，并恢复部分生育能力，为宫腔粘连的治疗提供了新的治疗策略，为IUA患者带来新的希望。

利用围产组织来源的间充质干细胞，尤其是胎盘来源的间充质干细胞，制备一种干细胞制剂，在粘连松解术后，通过子宫内膜进行肌肉注射间充质干细胞制剂，促进子宫内膜再生修复，治疗宫腔粘连，仍然是本领域技术人员迫切期待的。

发明目的

本发明的目的在于提供一种围产组织来源的间充质干细胞，尤其是胎盘来源的间充质干细胞，制备成的干细胞制剂，在粘连松解术后，通过子宫内膜进行肌肉注射间充质干细胞制剂，促进子宫内膜再生修复，治疗宫腔粘连。已经出人意料地发现，使用本发明的干细胞制剂治疗宫腔粘连呈现令人满意的效果。本发明基于此类发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了一种细胞制剂，其中包含胎盘间充质干细胞和药用溶媒。

根据本发明第一方面所述的细胞制剂，其中所述胎盘间充质干细胞是通过包括如下步骤的方法制备得到的：

(1)胎盘小叶的处理：将胎盘置于白瓷盘中，用组织清洗液冲洗以去除胎盘瘀血，剪取20g胎盘小叶组织于钢杯中，使用组织清洗液清洗两遍，并浸泡5min后，称取15g较好的组织于100mm玻璃皿中；加10ml组织清洗液，剪碎小叶至0.2cm³左右大小，加100ml组织清洗液搅匀后300目滤网过滤，再反复此操作以用组织清洗液清洗两次从而除去血细胞；所述的组织清洗液是包含1％双抗的0.9％生理盐水；