[发明专利]一种弧菌噬菌体制剂及其应用

说明书

本发明公开了一种弧菌噬菌体制剂及其应用，该噬菌体制剂是由非典型弧菌（Vibrio atypicus）噬菌体Vibrio phage vB_VatS‑XSL01与辅料混合而成，其总噬菌体有效量≥10⁶ PFU/mL；该噬菌体是从海水养殖水体中分离出的，对鲍体内多种致病弧菌具有烈性毒性，可以在非典型弧菌（Vibrio atypicus）侵染稚鲍过程中有效降低稚鲍死亡率并提高稚鲍摄食率；本发明提供的噬菌体制剂具有较广的杀菌性，作用时间快，效果持久稳定；噬菌体分离自养殖场环境，其自身由蛋白质和核酸组成，个别辅助试剂也均属于无毒无害化学物，不会对养殖生物和环境产生影响，无毒无害，安全环保。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，特别是一种弧菌噬菌体制剂及其应用。

背景技术

水产养殖业是我国重要的农业活动之一，2019年全国水产养殖总经济产值可达2.6万亿。水产养殖活动能够为全国提供优质的食粮，总蛋白贡献约为30%；为工业发展提供大量原料，涉及医药、化工、饲料等；同时能够大量弥补海洋捕捞，有利于维持环境生态平衡。

在水环境中，除了贝、鱼、海藻等大型生物外，还生活着大量肉眼不可见的微生物（粒径在20 μm以下）。微生物与水产养殖息息相关，其中微生物病害是水产养殖的重要灾害之一。2010年因微生物引发的病害涉及95个品种（王东石和高锦宇, 2015）；1997年山东沿海栉孔扇贝大量死亡与细菌病原体相关（杨晓岩等, 1998）；1996-1997年，大连连续突发大面积的海湾扇贝死亡灾害，弧菌是其主要病原菌。

其中，弧菌病已经成为水产养殖业病害的最主要拦路虎，甚至达到“谈弧色变”的程度。弧菌在水产养殖中是长期存在的，将弧菌控制在一定的数量内是不需要处理的，但如果受到环境、水草、有害菌的影响就会加大弧菌的繁殖量，非典型弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌等会迅速繁殖，污染水体，侵害养殖生物。

如何防治弧菌病害，一直是水产研究的重点。在20世纪40年代以后，抗生素疗法日渐盛行。但后期由于抗生素的广泛使用、滥用和过度使用，耐药细菌菌株（包括多耐药菌株）大量出现与流行，抗生素治疗效果受到严峻的挑战。近年来出现了一些“超级病菌”，它们几乎对所有的抗生素都不敏感，导致人类和动物对此类细菌的感染几乎无药可用，因此非常迫切需要新的抗感染武器来替代抗生素。在此背景下，人类把目光投向了噬菌体治疗。噬菌体是细菌的天敌,也就是“吃细菌的病毒”，噬菌体疗法就是针对性的利用病毒株对细菌进行侵染并裂解。噬菌体有严格的宿主特异性，不会感染其他种属的生物（包括养殖生物），所以不会对除了其侵染对象以外的其他生物死亡，因此具有专一性和安全性。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明的目的之一是提供一种噬菌体制剂。目的之二是提供一种该噬菌体制剂的应用。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案为：一种噬菌体制剂，其特征在于，其活性成分包括以下菌种：保藏编号为CCTCC M 2020729的非典型弧菌（Vibrio atypicus）噬菌体。

进一步的，还包括辅料，其中总噬菌体有效量≥10⁶ PFU/mL。

进一步的，所述辅料为SM缓冲液、无菌海水、海水富集培养基的一种或多种。

进一步的，所述SM缓冲液是指10 mM Tris–HCl，100 mM NaCl，10 mM MgSO₄，pH7.8，加入纯净水补足至1000mL。

进一步的，所述海水富集培养基是指在1L天然海水中添加4 g蛋白胨、1 g酵母膏和1 g醋酸钠，然后经过121℃高压灭菌20 min后冷却，pH为7.8。

上述一种噬菌体制剂的应用，将该噬菌体制剂应用到防治稚鲍死亡中。