[发明专利]土壤中抗生素的检测方法

权利要求书

1.土壤中抗生素的检测方法，抗生素为30种抗生素，其特征在于依次进行以下步骤：

(1)土样预处理：

土壤冷冻干燥，研磨后过筛；

(2)提取净化：

2.1)、利用步骤(1)所得的土壤进行两步式提取，得提取液；

所述两步式提取为：

第一步提取：

在1.0g步骤(1)所得的土壤中，加入5mL甲醇/乙腈混合溶液及50μL甲酸，涡旋提取后，离心，取上清液；

所述甲醇/乙腈混合溶液中，甲醇：乙腈＝1:1的体积比；

第二步提取：

在第一步提取的离心所得的沉淀中加入5mL的pH＝4的乙腈-McIlvaine缓冲液混合液，涡旋提取，离心，取上清液；

所述pH＝4的乙腈-McIlvaine缓冲液混合液由乙腈与pH＝4的McIlvaine缓冲液按照1:1的体积比混合而得；

将第一步提取所得的上清液与第二步提取所得的上清液进行合并，得提取液；

2.2)、向步骤2.1)所得的提取液中加入4.0g硫酸镁与1.0g氯化钠作为萃取剂，得到有机相；向有机相中加入氢氧化钠溶液，摇匀后加入50mg C18和150mg硫酸镁作为净化剂；取净化后上清液；氮吹尽干，溶解，过滤膜；

(3)超高效液相色谱—串联质谱联用定量检测抗生素浓度；

超高效液相色谱—串联质谱检测条件为：

色谱条件：

(1)色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm，1.0×50mm

(2)柱温：30℃

(3)进样量：3μL

(4)流动相A：0.1％甲酸+2mM乙酸铵；B：甲醇；

洗脱程序如下：0～1min，流动相B保持比例5％；1～2min，流动相B比例升至8％；2～4.5min，流动相B比例升至10％；4.5～7min，流动相比例升至35％；7～12min，流动相比例升至70％；12～16min，流动相B比例升至95％；16～19min，流动相B保持95％；19～19.5min，流动相B比例恢复5％并保持至22.5min；

质谱条件：

(1)离子源：电喷雾离子源

(2)检测方式：多反应监测

(3)毛细管电压：3kV

(4)离子源温度：150℃

(5)脱溶剂气温度：550℃

(6)脱溶剂气流量：1000L/Hr

(7)锥孔气流量：200L/Hr；

质谱参数为：

2.根据权利要求1所述土壤中抗生素的检测方法，其特征在于所述步骤2.2)为：

向步骤2.1)所得的提取液中加入4.0g硫酸镁与1.0g氯化钠作为萃取剂，震荡后离心，取位于上层的有机相，向有机相中加入10μL浓度为1M的氢氧化钠溶液，摇匀；

再加入50mg C18和150mg硫酸镁作为净化剂，涡旋后离心，取上清液氮吹尽干，加入1mL甲醇/水混合液进行溶解，过0.22μm滤膜；

甲醇/水混合液中，甲醇：水＝1:1的体积比。