[发明专利]用于丙肝病毒检测的DNA聚合酶混合物

说明书

本发明提供了一种用于丙肝病毒检测的DNA聚合酶混合物，具体地本发明通过将野生型DNA聚合酶和突变型DNA聚合酶突变体6混合，获得了更高的PCR扩增效率，表现出了显著的协同效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种用于丙肝病毒检测的DNA聚合酶混合物。

背景技术

Taq酶是一种来源于耐热性细菌Thermus aquaticus的耐热性DNA聚合酶，分子量94KDa，在镁离子存在的条件下，其最适反应温度为75-80℃，在95℃下的活性半衰期为40分钟，具有5’-3’核酸外切酶活性。由于其具有耐高温的特性，因此广泛用于聚合酶链式反应(PCR)，是核酸扩增、检测等反应的首选用酶。商品化Taq酶使用大肠杆菌原核表达系统进行克隆及表达。

现代分子生物检测技术对PCR反应的灵敏度、精确度、耐用性要求越来越高，野生型Taq酶无法完全满足实际应用的需求。为使其更加适应特定技术的使用，对Taq酶序列的突变改造进行了很多的尝试，如：

添加DNA结合结构域使其具有更强的延伸活性(Wang Y(2004).A novel strategyto engineer DNA polymerases for enhanced processivity and improvedperformance in vitro.Nucleic Acids Res 32,1197–1207))；

通过定点突变、删除结构域使其具有更高的保真性(Suzuki M,Yoshida S,AdmanET,Blank A,Loeb LA(2000)Thermus Aquaticus DNA polymerase I mutants withaltered fidelity.Interacting mutations in the O-Helix.J Biol Chem 275:32728–32735)、更高的DNA聚合活性(Mutant Taq DNA polymerases with improved elongationability as a useful reagent for genetic engineering.Front Microbiol 5:461.doi:10.3389/fmicb.2014.00461)、耐受高浓度抑制剂(Zhang Z,Kermekchiev MB,Barnes WM(2010)Direct DNA amplification from crude clinical samples using aPCR enhancer cocktail and novel mutants of Taq.J Mol Diagn 12:152–161)、降低5’-3’核酸外切酶活性(Vainshtein I,Atrazhev A,Eom SH,Elliott JF,Wishart DS,Malcolm BA(1996)Peptide rescue of an N-Terminal truncation of the Stoffelfragment of Taq DNA polymerase.Protein Sci 5:51785–51792)。

本领域技术人员致力于开发扩增效率更高的DNA聚合酶，以满足现代分子生物检测技术的需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于丙肝病毒检测的DNA聚合酶混合物。

在本发明的第一方面，提供了一种DNA聚合酶混合物，所述DNA聚合酶混合物包括野生型DNA聚合酶和突变型DNA聚合酶；其中，所述野生型DNA聚合酶的氨基酸序列如SEQ IDNO.:2所示；

所述突变型DNA聚合酶为突变体6：在SEQ ID NO.:2所示的野生型DNA聚合酶基础上进行突变，并且所述突变体6具有如下突变位点：H785G。

在另一优选例中，所述突变体6的突变位点为：H785G。