[发明专利]一种水稻多抗融合基因及其应用

权利要求书

1.一种水稻多抗融合基因，其特征在于，所述融合基因包括人工合成和/或修饰后的抗草甘膦基因I.variabilis-mEPSPS*、螟虫抗性基因cry1C*、褐飞虱抗性基因Bph14*和OsLecRK1*、白叶枯病抗性基因Xa23*和稻瘟病抗性基因Pi9*；其中，所述抗草甘膦基因I.variabilis-mEPSPS*的核苷酸全序列如SEQ ID NO：1所示，所述螟虫抗性基因cry1C*的核苷酸全序列如SEQ ID NO：2所示，所述褐飞虱抗性基因Bph14*的核苷酸全序列如SEQ IDNO：3所示，所述褐飞虱抗性基因OsLecRK1*的核苷酸全序列如SEQ ID NO：4所示，所述白叶枯病抗性基因Xa23*的核苷酸全序列如SEQ ID NO：5所示，所述稻瘟病抗性基因Pi9*的核苷酸全序列如SEQ ID NO：6所示。

2.一种如权利要求1所述融合基因的表达载体，其特征在于，将人工合成和/或修饰的I.variabilis-mEPSPS*、cry1C*、Bph14*、OsLecRK1*、Xa23*、Pi9*基因通过多基因组装系统TGSII重组到基础载体上，形成植物表达载体。

3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述基础载体为pYLTAC380。

4.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述植物表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。

5.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述人工合成和/或修饰的I.variabilis-mEPSPS*、cry1C*、Bph14*、OsLecRK1*、Xa23*、Pi9*基因重组于pYLTAC380基础载体的LoxP位点上。

6.一种多抗转基因水稻的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将权利要求2～5任意一项所述的植物表达载体采用农杆菌转入法转入水稻愈伤组织，经组织培养得到T₀代转基因植株，对T₀代转基因植株进行拷贝数分析，获得单拷贝T₀代转基因株系；对单拷贝T₀代转基因植株收种得到T₁代；对T₁代转基因株系进行整合位点分析，获得I.variabilis-mEPSPS*、cry1C*、Bph14*、OsLecRK1*、Xa23*、Pi9*基因整合在基因间区的T₁代转基因株系，即获得转基因水稻MRR17。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述水稻愈伤组织是由水稻胚性愈伤组织经继代培养2～5周后得到。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，利用Southern杂交分析法对T₀代转基因植株进行拷贝数分析。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将得到的整合在基因间区的T₁代转基因株系收种后，将收获的种子在含有草甘膦的培养基上进行发芽试验获得MRR17纯合阳性转基因单株。

10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的转基因水稻MRR17基因组的特定位点上携带一种能稳定遗传的复合转基因结构，所述特定位点为水稻基因组第2条染色体，所述的复合转基因结构由以下序列沿5’到3’方向顺序连接而成：

(i)SEQ ID NO：8所示的插入位点5’端侧翼序列；

(ii)SEQ ID NO：9所示的插入的外源基因序列；

(iii)SEQ ID NO：10所示的插入位点3’端侧翼序列。