[发明专利]一种与白菜花色性状相关的SNP分子标记及其检测引物、检测试剂盒和应用

权利要求书

1.一种与白菜花色性状相关的SNP分子标记，其特征在于，所述SNP分子标记位于如SEQID NO：1所示的基因片段的第101位，第101位碱基为G/-，其中-表示缺失。

2.一种基于竞争性等位基因特异性PCR技术检测白菜花色用引物，其特征在于，包括TXBH83Fa、TXBH83Fb和TXBH83R；

所述TXBH83Fa的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述TXBH83Fb的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

所述TXBH83R的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

其中TXBH83Fa或TXBH83Fb的5'端序列为标记有FAM或HEX荧光基团的标签序列。

3.一种基于竞争性等位基因特异性PCR技术检测白菜花色用试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述引物。

4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括KASP Master mix。

5.权利要求1所述SNP分子标记、权利要求2所述引物或权利要求3或4所述试剂盒在检测白菜花色或检测白菜花色基因型中的应用。

6.权利要求1所述SNP分子标记、权利要求2所述引物或权利要求3或4所述试剂盒在白菜植物育种中的应用。

7.一种高通量检测白菜花色的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待检测花色的白菜基因组DNA；

2)以步骤1)中基因组DNA为模板，用权利要求2所述引物进行竞争性等位基因特异性PCR扩增，得到KASP扩增产物；

3)将所述KASP扩增产物进行终点法荧光信号读取，得到基因分型结果；

由引物TXBH83Fa和TXBH83R扩增得到的基因型片段来自于具有黄花性状的白菜；

由引物TXBH83Fb和TXBH83R扩增得到的基因型片段来自于具有白花性状的白菜。

8.根据权利要求7所述检测白菜花色的方法，其特征在于，所述竞争性等位基因特异性PCR扩增的反应程序：第一阶段94℃变性15min；第二阶段94℃变性20s，61℃退火60s，共10个循环，第二个阶段循环开始，每个循环降低0.6℃；第三个阶段94℃变性20s，55℃退火60s，共26个循环；第四阶段37℃1min。

9.根据权利要求7或8所述检测白菜花色的方法，其特征在于，所述竞争性等位基因特异性PCR扩增的反应体系为8μL：1.5μL 80ng/μLDNA，4μL2×KASP Master mix，0.14μL引物混合物，其余用ddH₂O补齐；

所述引物混合物是由浓度均为100μmol/L的TXBH83Fa、TXBH83Fb、TXBH83R与ddH₂O按12:12:30:46的体积比混合得到。