[发明专利]具有抗氧化性和DPP-IV抑制活性的多肽混合物及其制备方法

说明书

本发明公开了具有抗氧化性和DPP‑IV抑制活性的多肽混合物，多肽混合物的氨基酸序列包括：HLVDEPQNLIK、DDQNPHSSN、DDEVDVDGTVEEDLGK。多肽混合物来源于乳清蛋白。多肽混合物的制备方法：步骤一：将浓度为1％的乳清分离蛋白溶液进行超高压处理，得到超高压分离乳清蛋白液；步骤二：调节步骤一中所述超高压分离乳清蛋白液的pH至2.0‑3.0，然后加入胃蛋白酶和酸性蛋白酶，加热水解，灭酶，离心取上清液，旋转蒸发后冷冻干燥，得到多肽混合物粗品；步骤三：将所述多肽混合物粗品浓度调整为1mg/mL，采用凝胶过滤色谱和RP‑HPLC对其进行分离提纯。本发明的多肽混合物抗氧化性及DPP‑IV抑制活性高，制备工艺简单，易操作，环保无污染。

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，具体涉及具有抗氧化性和DPP-IV抑制活性的多肽混合物及其制备方法。

背景技术

人体内细胞在代谢过程中产生大量自由基和活性氧，而抗氧化系统可以有效地清除自由基。当自由基产生过多或抗氧化系统失效时，这种平衡就会被打破，机体将处于氧化应激状态，这种情况会导致细胞损伤。已有研究认为持续的氧化应激反应是神经退行性疾病、癌症、肝损伤、衰老、心血管疾病、慢性胰腺炎等疾病的诱因。细胞一般通过预防、修复、产生抗氧化剂或摄入膳食中的抗氧化剂来保护自己免受氧化损伤。已知的膳食抗氧化剂包括抗坏血酸,维生素E,多酚类物质和类胡萝卜素等。

糖尿病是一种在世界范围内广泛传播的疾病，患病人数呈指数型增长，是世界第三大疾病。糖尿病属于代谢性疾病，主要是由胰岛素代谢障碍或分泌不足引起，并且以高血糖浓度为特征。糖尿病常导致不同器官发生长期性损伤，功能性障碍或衰竭，尤其是眼睛、肾脏、神经、心脏和血管，是一种慢性终身性疾病。随着对糖尿病发病机制的研究，DPP-IV逐渐成为治疗糖尿病的新靶点。DPP-IV是一种普遍存在于肾脏和胃肠道等组织中的丝氨酸肽酶，可以降解包括胰高血糖素样肽1(Glucagon like peptide 1,GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(Glucose-dependent insulinotropic polypeptide,GIP)在内的肠促胰岛素。这些肠促胰岛素的降解使其促胰岛素活性降低，从而导致胰岛素分泌不足、血糖升高。因此，抑制体内的DPP-IV可有效保持肠促胰岛素的活性，延长促胰岛素的作用时间，可用于在餐后阶段增加胰岛素的分泌，从而可以实现更好的血糖调节。

天然的抗氧化剂、DPP-IV抑制剂与人工合成的抗氧化剂、DPP-IV抑制剂相比，具有作用温和、安全性高、副作用小等优点。乳清蛋白因其酶解物具有较强的抗氧化、降血糖等作用而备受关注。

乳清蛋白是乳清的主要固形物之一，具有较高的营养价值和生物利用效率，被广泛的应用于各种食品中。乳清蛋白主要由β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、免疫球蛋白及其他多种活性成分组成。乳清蛋白产品可以分为蛋白质含量在35％-85％的乳清浓缩蛋白(WPC)和蛋白质含量在90％以上的乳清分离蛋白(WPI)等。乳清分离蛋白包含有多种生物活性序列,用适当的蛋白酶水解并从乳清分离蛋白中释放出来之后,成为具有生理活性的肽段。酶解具有水解条件温和、对蛋白质底物破坏较小等优点，是生产食品级蛋白质水解物的理想方法。酶解前对乳清分离蛋白进行预处理改性，可以有效提高乳清分离蛋白的酶解效率。目前常见的乳清分离蛋白预处理改性方法主要是热处理法。

超高压是一种非热处理技术。通过将样品密封于腔体中，以水或其他流体作为传压介质，在仪器内部瞬时且均匀的将压力传送至样品。超高压技术能够使蛋白质发生结构变化，从而改变蛋白质的功能特性。超高压一般不会改变蛋白质的共价键及氢键，对一级结构基本无影响，但会明显改变蛋白质的非共价键，从而影响其高级结构。超高压技术对蛋白质结构构象的影响是一种复杂的现象，与蛋白质的种类、浓度、压力大小、施压时间、温度和pH有关。超高压对蛋白质结构的影响会导致暴露出更多的酶切位点从而有利于水解反应的进行。与热处理等方法改性乳清分离蛋白相比，超高压处理具有安全无毒，快速高效，节约能源，绿色环保等优点，在乳清分离蛋白预处理改性与功能性产品开发方面潜力巨大。