[发明专利]油包水型复合佐剂及其制备方法和应用、疫苗的制备方法

说明书

本发明提供了一种油包水型复合佐剂及其制备方法和应用、疫苗的制备方法，涉及生物技术领域。本发明提供的油包水型复合佐剂，按质量百分比计，包括白油79％～89％、亲水乳化剂3％～6％和亲油乳化剂8％～15％，其中白油为法国道达尔EOLANE150白油，稳定性好，碳链长度分布集中，应激小、安全性高；以特定比例的白油、亲水乳化剂和亲油乳化剂制备得到的油包水型复合佐剂的环烷基含量高，易于机体吸收；正异构比例适中，以其为原料制备得到疫苗的效价高且持续时间长。本发明提供的疫苗的制备方法简单，制备得到的疫苗稳定性好，保存时间长，免疫后抗体持续期长；黏度低，更易于注射；免疫后副反应低，免疫应答水平高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种油包水型复合佐剂及其制备方法和应用、疫苗的制备方法。

背景技术

所谓佐剂就是当一种抗原物质先于抗原或与抗原混合或同时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，并能在免疫反应中诱导全面持久的免疫应答。在疫苗制剂中，佐剂的功能主要包括：增强疫苗抗原的免疫原性；促进细胞免疫和体液免疫，优化免疫应答；增进抗原与黏膜之间的传递以及免疫接触；减少疫苗成分中抗原的需求量以及在实施过程中的免疫接种次数；优化抗原结构，维持抗原构象等。灭活疫苗尤其是病毒灭活疫苗因其抗原分子小、免疫原性不强，不能引起足够强的免疫应答，需要佐剂辅助刺激机体才能产生较强的免疫应答，矿物油佐剂加入疫苗制剂后能促进、增强或延长机体对抗原特异性免疫应答，效果远远优于水质佐剂，这也是口蹄疫灭活疫苗、禽流感灭活疫苗等一直使用油佐剂的原因所在。油佐剂疫苗按照剂型又分可为水包油型(O/W)、油包水型(W/O)、水包油包水型(W/O/W)，有些还包含其他免疫刺激性物质，而油包水剂型(W/O)有着免疫持续期长、兼顾体液免疫和细胞免疫、成本低廉等诸多优势，所以在灭活疫苗上广泛应用，特别是禽用灭活疫苗。

然而，现有的油包水型(W/O)疫苗的制备过程较为繁琐，批间受到矿物油品种以及乳化剂的加入等诸多因素影响差异较大。一方面，需要在抗原内加入亲水性的乳化剂，吐温-80等；还需要在矿物油中加入亲油性的乳化剂和助悬剂，如司盘-80、硬脂酸铝等，诸多原料的加入造成操作的繁琐，进而使疫苗的质量把控较为困难。而硬脂酸铝的溶解性较差，必须通过加热至100℃以上才能充分溶解，这使得佐剂的除菌方式较为单一，只能采用高温灭菌的方法实现，而无法采用过滤除菌等其它更为简易的方式，而硬脂酸铝本身带有一定毒性，这在使用过程中也有一定的安全隐患；另一方面，诸多物质的加入也给疫苗最终的剂型、黏度、稳定性等指标带来更多的不可控因素，可能会造成疫苗质量的不稳定。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种油包水型复合佐剂，以缓解现有技术中存在的佐剂灭菌方式单一，批间差异大，使用方法繁琐的技术问题。

本发明的第二目的在于提供一种油包水型复合佐剂的制备方法，该方法简单方便。

本发明的第三目的在于提供一种油包水型复合佐剂在制备疫苗中的应用。

本发明的第四目的在于提供一种疫苗的制备方法，该方法操作简单，制备得到的疫苗黏度小，易于注射，稳定性好，有效抗体持续时间长，副反应小。

为了解决上述技术问题，特采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种油包水型复合佐剂，包括按质量百分比计的如下组分：白油79％～89％、亲水乳化剂3％～6％和亲油乳化剂8％～15％；

所述白油为法国道达尔EOLANE150白油。

作为进一步技术方案，包括按质量百分比计的如下组分：白油83％-89％、亲水乳化剂3％-5％和亲油乳化剂8％-12％。

作为进一步技术方案，包括按质量百分比计的如下组分：白油89％、亲水乳化剂3％和亲油乳化剂8％。

作为进一步技术方案，所述亲水乳化剂包括吐温-80和/或吐温-85。