[发明专利]一种烟草NtPEP2基因编码多肽抗青枯病制剂的制备及其应用

说明书

本发明公开了一种烟草NtPEP2基因编码多肽抗青枯病制剂的制备及其应用。烟草NtPEP2基因编码NtPEP2蛋白，其经过切割和化学修饰后产生NtPEP2多肽，本发明首次发现NtPEP2多肽参与青枯病抗性调控，目前包括烟草在内的作物中尚未见报道。本发明的NtPEP2多肽激素抗烟草青枯病制剂制备和使用方法简单，可操作性强，有效提高了烟草对青枯病的抗性，且具有生物安全性。

技术领域

本发明涉及植物青枯病抗病制剂领域，尤其涉及一种烟草NtPEP2基因、蛋白、多肽、抗青枯病制剂及其制备和它们的应用。

背景技术

青枯病(Bacterial Wilt)是一种毁灭性地危害烟草生产的细菌性病害，该病害发病植株呈现茎叶萎蔫，最后枯死。研究表明，青枯病在世界范围内均有分布，病原物为青枯雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum E.F.Smith)，是土壤传播的，并在炎热潮湿的环境中繁殖。烟草青枯病的防治包括化学、农业和生物防治等方法，目前这些方法仍不能有效解决问题。在烟草等作物中，挖掘并利用青枯病抗性基因是防治青枯病的根本途径。

多肽是植物体内自身合成的由氨基酸所组成的一类具有重要调控作用的微量小分子物质，因其微量高效的特征又被称为多肽激素。在植物体中，多肽是由蛋白前体在翻译后完成切割、修饰，最终生成的只有若干个氨基酸组成的功能多肽。作为配体与受体识别，启动信号转导等，植物多肽激素被广泛报道。在植物中，外施多肽激素可产生与多肽激素编码基因过量表达相类似的表型。多肽激素可以通过人工合成。目前多肽激素在植物尤其是作物上的应用研究很少。

在烟草中，NtPEP2基因编码NtPEP2蛋白，其经过切割和化学修饰后产生NtPEP2多肽。NtPEP2多肽是否参与青枯病抗性调控，目前包括烟草在内的作物中尚未见报道。

发明内容

本发明包含六个目的，主要是能够提高植物，尤其是烟草对青枯病的抗性。具体包括：

第一、提供一种烟草NtPEP2基因；

第二、提供一种烟草NtPEP2蛋白；

第三、提供一种烟草NtPEP2多肽；

第四、提供一种抗青枯病制剂；

第五、提供抗青枯病制剂的制备方法；

第六、提供抗青枯病制剂的应用。

本发明所述的烟草NtPEP2基因，基因CDS序列如SEQ ID NO.1所示。所述的基因序列还包括其相似性不低于95％的具有类似功能的基因序列。所述的类似功能包括表达抗青枯病的蛋白。进一步的，所述的抗青枯病的具体对象为烟草。

本发明所述的NtPEP2蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述的蛋白序列还包括其相似性不低于95％的具有类似功能的蛋白序列。所述的类似功能包括抗青枯病。进一步的，所述的抗青枯病的具体对象为烟草。

本发明所述的NtPEP2多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。所述的NtPEP2多肽序列还包括其相似性不低于95％的具有类似功能的多肽序列；所述的类似功能包括抗青枯病。进一步的，所述的抗青枯病的具体对象为烟草。

本发明所述的抗青枯病制剂，包括上述的NtPEP2多肽。

NtPEP2多肽的浓度为1-10μmol/L。进一步的，还包含2-(N-吗啉)乙磺酸溶液。2-(N-吗啉)乙磺酸溶液浓度2.8-3.2mmol/L。2-(N-吗啉)乙磺酸溶液的pH为5.6-6.0。进一步的，所述2-(N-吗啉)乙磺酸溶液为2-(N-吗啉)乙磺酸溶解于MS液体培养基或者水中。

本发明所述的抗青枯病制剂的制备方法，将ddH₂O配制的NtPEP2多肽母液添加到2-(N-吗啉)乙磺酸的MS液体培养基溶液中混匀，即得。