[发明专利]一种提高鸟苷发酵菌株产率的方法

权利要求书

1.一种提高鸟苷发酵菌株产率的方法，其步骤为：

A：确立菌种耐高温的目标温度为40～42℃；

B：在淀粉芽孢杆菌作鸟苷生产菌的发酵生产过程中，选取发酵糖酸转化率时间段在42小时的发酵液作为首次出发菌液；

C：取步骤B的首次出发菌液划线于固体茄瓶斜面基中，32～35℃培养20～24小时，将茄瓶斜面种用100ml生理盐水洗脱入5L发酵罐的发酵培养基中进行发酵，选取24～80小时发酵液作变温式定向培育下一阶段的出发菌液；

D：按C步骤操作，重复1～5次变温式定向培育，每次温度升高0.5～1.0℃，直到5L罐最高温度达菌种耐高温的目标温度值，选取24～80小时的发酵液作终段出发菌液；

E：挑选步骤D所得的终段出发菌液1ml用0.85％生理盐水梯度稀释至10^－8，分别取10^－4、10^－5、10^－6、10^－7、10^－8稀释液涂布在固体培养基平板上，每稀释涂布5个，制得平板种，32～35℃培养36～72小时，达单株菌落直径达0.8～1.5mm；挑选单菌落分别接种于固体培养基斜面中，摇瓶发酵得产率高的单菌株；

F：取步骤E选得的高产单菌株出发，将菌种划线于固体茄瓶斜面基中，32～35℃培养20～24小时，将茄瓶斜面种用生理盐水洗脱入发酵罐的发酵培养基中，培养至放罐参数。

2.根据权利要求1所述的提高鸟苷菌株发酵产率的方法，其特征在于：所述步骤B的发酵过程控制条件是起始温度为34～35℃，12小时温度达到36～37℃，24～80小时，温度达到37～42℃。

3.根据权利要求2所述的提高鸟苷菌株发酵产率的方法，其特征在于：所述步骤B的还包括在发酵24小时后，每隔6小时无菌抽取10～30ml不同周期的发酵液，计算发酵糖酸转化率，同步另外取样测定鸟苷含量、还原糖含量、发酵液体积的步骤。

4.根据权利要求2所述的提高鸟苷菌株发酵产率的方法，其特征在于：

所述步骤C的固体茄瓶培养基配方为：可溶性淀粉3.0±0.5％、酵母粉1.0±0.5％、蛋白胨0.5±0.1％、琼脂2.0±0.2％，PH7.0；

所述步骤C的5L发酵罐的发酵培养基配方为：葡萄糖12％、酵母粉2±0.5％、硫酸铵3.0±0.5％、磷酸二氢钾0.3±0.1％、硫酸亚铁0.002％，PH7.0。

5.根据权利要求1所述的提高鸟苷菌株发酵产率的方法，其特征在于：所述步骤E的摇瓶发酵是指挑选单菌落分别接种于固体培养基斜面中，32～35℃培养24小时，接斜面种一环入摇瓶发酵基中，于往复式摇床7.5cm冲程、110～120rpa、37～40℃培养62～72小时，选取摇瓶发酵得产率高的单菌株。

6.根据权利要求1所述的提高鸟苷菌株发酵产率的方法，其特征在于：所述步骤E的固体培养基配方为：可溶性淀粉3.0±0.5％、酵母粉1.0±0.5％、蛋白胨0.5±0.1％、琼脂2.0±0.2％，PH7.0；

所述步骤E的摇瓶发酵培养基配方为：葡萄糖12％、酵母粉2±0.5％、硫酸铵3.0±0.5％、磷酸二氢钾0.3±0.1％、硫酸亚铁0.002％，轻质碳酸钙3.0％，PH7.0。

7.根据权利要求1所述的提高鸟苷菌株发酵产率的方法，其特征在于：所述步骤F发酵过程控制条件：发酵起始温度为34～35℃，12小时温度达到36～37℃，24～80小时温度达到37～42℃。

8.根据权利要求1所述的提高鸟苷菌株发酵产率的方法，其特征在于：所述步骤C是选取42小时发酵液作变温式定向培育下一阶段的出发菌液。

9.根据权利要求1所述的提高鸟苷菌株发酵产率的方法，其特征在于：所述步骤D是选取42小时发酵液作终段出发菌液。