[发明专利]通过连接至促性腺激素羧基端肽来增加多肽的流体动力学体积的方法

权利要求书

1.一种增加重组人生长激素(hGH)多肽的流体动力学尺寸或流体动力学体积的方法，所述方法包括：

(a)将1个绒毛膜促性腺激素羧基端肽(CTP)单元重组连接至所述hGH的氨基末端，且将2个CTP单元重组连接至所述hGH的羧基末端；和

(b)在宿主细胞中表达所述重组CTP修饰的多肽，其中表达包括糖基化所述CTP单元；

其中所述CTP修饰的多肽可选地包括连接至所述CTP修饰的多肽的氨基末端的信号肽，且

其中所述糖基化的CTP单元递增地增加所述hGH的流体动力学尺寸，每个所述糖基化的CTP单元递增约28-53kDa。

2.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述hGH的DNA连接至编码CTP肽的DNA序列。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述编码所述hGH的DNA编码SEQ ID NO:5至SEQ IDNO:8中任一项的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中所述CTP单元中的至少一个的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2组成的组。

5.根据权利要求1-4中的任一项所述的方法，其中所述CTP单元中的至少一个的氨基酸序列被截短，且包括SEQ ID NO:3的前10个氨基酸(SSSSKAPPPS)。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述CTP修饰的多肽包括前体CTP修饰的hGH，其中所述氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述CTP修饰的多肽包括成熟CTP修饰的hGH，其中所述氨基酸序列如SEQ ID NO:11的氨基酸27-301所示。

8.根据权利要求1-7中的任一项所述的方法，其中所述糖基化是O-糖基化。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述O-糖基化是通过α-糖苷键连接至蛋白链中的丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)的GalNAc。

10.根据权利要求8-9中的任一项所述的方法，其中所述O-糖基化是核心1糖基化、O-岩藻糖基化、O-甘露糖基化或O-糖基化。

11.根据权利要求8-10中的任一项所述的方法，其中所述O-糖基化之后添加1-60个半乳糖分子；或者所述O-糖基化之后添加1-120个唾液酸分子；或者它们的组合。

12.根据权利要求1-11中的任一项所述的方法，其中增加所述流体动力学尺寸或体积增加所述多肽的生物利用度。

13.根据权利要求1-12中的任一项所述的方法，其中所述CTP单元中的至少一个经由接头连接至所述多肽，且所述接头是肽键。

14.根据权利要求1-13中的任一项所述的方法，其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

15.一种增加多肽的表观分子量的方法，所述方法包括下述步骤：根据权利要求1-14中的任一项增加流体动力学体积。

16.一种增加多肽的血清半衰期的方法，所述方法通过根据权利要求1-14中的任一项的包括增加所述多肽的流体动力学体积的方法进行。