[发明专利]一株分泌异噁草酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一种分泌异噁草酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明分泌异噁草酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC06，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏日期：2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19181。利用该细胞株分泌获得异噁草酮单克隆抗体用于进行食品安全检测中异噁草酮残留的分析检测。本发明获得的异噁草酮单克隆抗体可用于免疫分析检测，其对异噁草酮有较好的检测灵敏度和特异性（IC₅₀值为5.5 ng/mL）。本发明成果可用于制备异噁草酮的免疫检测试剂盒以及胶体金试纸条，为谷物、油料、蔬菜、糖料、烟草中异噁草酮残留量的检测提供有力的检测方法与手段。

技术领域

本发明涉及一株分泌异噁草酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

异噁草酮（clomazone，简称CLO），又称异噁草松，国外商品名为广灭灵，是一种选择性芽前除草剂。其施用后会被植物的根、幼芽吸收，随蒸腾作用向上传导到植物的各个部位，敏感植物叶绿素的生物合成会受抑制，虽然能萌芽出土，但无色素，白化，在短期内死亡，而大豆等耐药性植物吸收后能通过代谢作用，将其转化为无杀草能力的降解产物，使自身免受其害。因此，其广泛应用于大豆田、水稻田、甘蔗田及烟草田等来防除阔叶杂草和禾本科杂草。但其属长残留性除草剂，半衰期约为24 d，在土壤中的生物活性可持续6个月以上，易对后茬小麦、向日葵等作物及多种蔬菜造成药害残留，并且有研究表明其对哺乳动物的基因具有潜在的致突变性，会增加癌症风险，因此国标中对其最低残留量做出了明确规定，要求其最低检测线为10 ng/mL。

异噁草酮含量分析方法有：高效液相色谱法(HPLC)、液质联用 (LC-MS)等仪器方法，这些检测方法具有耗时、步骤繁琐、无法进行现场快速检测、成本高等缺点。因此建立快速简便的异噁草酮检测方法具有重要意义。酶联免疫法（ELISA）是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，适用于大量样本的现场快速检测，为异噁草酮检测提供了一种新的检测途径。

发明内容

本发明的目的是提供一株分泌抗异噁草酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，由该细胞株分泌的抗体针对异噁草酮具有较高的检测灵敏度，可以用来建立异噁草酮的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株分泌异噁草酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC06，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期：2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19181。

异噁草酮单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No.19181的杂交瘤细胞株ABC06分泌产生。

所述异噁草酮单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中异噁草酮残留量的分析检测。

本发明提供的分泌异噁草酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC06的制备基本步骤为：

（1）异噁草酮半抗原的制备：将26 μL浓硝酸溶于100 μL浓硫酸，混匀，制成混合酸溶液备用；取100 mg异噁草酮溶于325 μL浓硫酸，4℃搅拌溶解，向异噁草酮溶液中逐滴滴入混合酸溶液，-10℃反应7 h；恢复至0℃，加入2 mL冰水，逐滴加入浓氨水调节pH至4.8-5.2，有浅黄色固体析出，减压抽滤，干燥，得到产物为CLO- NO₂；取50 mg CLO- NO₂溶于乙醇/醋酸/水（体积比2:2:1）混合溶液中，置于圆底烧瓶中，加入20 mg锌粉和3 μL浓盐酸，60℃加热回流15 min，室温搅拌40 min，由混浊变为澄清；过滤除去锌粉，乙酸乙酯萃取，收集有机相，洗涤，干燥，减压蒸干，得到半抗原CLO-NH₂，半抗原合成路线见杂交瘤细胞株ABC06的制备；