[发明专利]一种靶向敲减Atf6α基因表达的shRNA、重组载体及其应用

说明书

本发明提供了一种靶向敲减小鼠肝脏Atf6α基因表达的重组8型腺相关病毒(rAAV8)‑Atf6α shRNA构建及其应用，属于肝脏疾病治疗研究技术领域，本发明中，所述shRNA靶向的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述靶向敲减小鼠肝脏Atf6α基因表达的重组载体，包括骨架载体pAAV8和所述shRNA。本发明所述靶向敲减Atf6α基因表达的shRNA能够敲减Atf6α基因表达，能够应用于肝内内质网应激相关的小鼠模型研究中，有利于进一步了解Atf6α基因表达在肝损伤中的作用；从而为临床防治肝脏疾病提供新思路和靶点。

技术领域

本发明属于肝脏疾病治疗研究技术领域，尤其涉及一种靶向敲减Atf6α基因表达的shRNA、重组载体及其应用。

背景技术

肝脏作为人体重要的解毒与消化器官，易暴露于损伤因素中。因其含有丰富的内质网(ER)，在受到刺激时易产生内质网应激(ERS)来促进细胞内环境恢复平衡。ERS被认为参与急性和慢性肝病的发病机制，如各种肝炎、脂肪变性、胆汁淤积、纤维化和肝细胞癌。ERS可通过影响细胞凋亡及程序性坏死与肝损伤密切相关。

研究表明，ATF6α是内质网应激感受器蛋白，在维持细胞内环境稳态中起着关键作用。调节Atf6α基因表达有利于研究ATF6α信号在肝损伤中的作用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种靶向敲减Atf6α基因表达的shRNA、重组载体及其应用；本发明提供的shRNA、重组载体能够敲减Atf6α基因的表达，适用于肝内内质网应激相关的小鼠模型研究中，利于进一步了解Atf6α基因表达在肝损伤中的作用；从而为临床防治肝脏疾病提供新思路和靶点。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种靶向敲减Atf6α基因表达的shRNA，所述shRNA靶向的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，具体如下5’-GCAGTCGATTATCAGCATACA-3’。

优选的，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，具体如下：5’-TGTATGCTGATAATCGACTGC-3’。

本发明提供了一种靶向敲减Atf6α基因表达的重组载体，包括骨架载体pAAV8和所述的shRNA。

本发明提供了所述的shRNA、所述的重组载体在制备肝损伤的小鼠模型中的应用。

优选的，所述肝损伤包括由肝内内质网应激相关的肝损伤。

优选的，将所述靶向敲减Atf6α基因表达的重组载体导入小鼠体内。

优选的，所述靶向敲减Atf6α基因表达的重组载体共导入2次，间隔时间为40～60h。

优选的，所述靶向敲减Atf6α基因表达的重组载体每次导入的量为(0.5～1.5)×10¹⁰vg/只。

本发明的有益效果：本发明提供的靶向敲减Atf6α基因表达的shRNA以及重组载体，能够应用于肝损伤模型小鼠的肝内内质网应激相关研究中，从而为临床防治肝脏疾病提供新思路和靶点。

附图说明

图1本发明提供的基因沉默腺相关病毒骨架示意图；

图2为完成基因沉默腺相关病毒质粒构建后，对插入的shRNA序列进行测序比对鉴定结果；

图3为体内Atf6αshRNA预干预小鼠6周，后腹腔注射四氯化碳诱导24h的血清ALT水平变化；

图4为体内Atf6αshRNA预干预小鼠6周，后腹腔注射四氯化碳诱导24h的血清TBil水平变化；