[发明专利]大豆gma-miR4359b基因、其表达载体、制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种大豆gma‑miR4359b基因、其表达载体、制备方法及其应用，属于基因工程技术领域。该大豆gma‑miR4359b基因的序列任选自如下(a)或(b)所述的序列之一：(a)具有序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；(b)以序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列为核心构建的核苷酸序列。通过250mM NaCl对转基因与对照复合体进行胁迫后发现，该gma‑miR4359b基因参与盐胁迫响应，在毛状根中过表达可以提高复合体大豆对盐胁迫抗性，在植物生长发育与盐胁迫应答过程中起到了重要作用，这也为大豆抵抗非生物胁迫提供理想候选基因。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种大豆gma-miR4359b基因、其表达载体、制备方法及其应用

背景技术

大豆栽培历史悠久，是中国重要粮食作物之一。当今世界人们对大豆的需求量持续增加，而大豆属于甜土作物，所以盐胁迫成为影响大豆产量的主要原因。提高大豆对盐胁迫抗性尤为重要，然而传统育种对植物基因的改良，提高植物抗逆性效果有限，选育周期长，不能准确地对某个基因进行操作和选择，而转基因技术目标明确，具有良好的可控性，可以预期后代表现，所以利用转基因技术提高作物对非生物胁迫的抗性，已成为目前抗逆育种的主要方法。

MicroRNAs(miRNAs)是一类小的非编码调控RNAs，其长度为20-24个核苷酸，在转录后水平通过切割靶mRNAs或翻译抑制负调控目标基因，在细胞内具有多种重要的调节功能，是植物在基因调控、发育过程中抵抗生物胁迫与非生物胁迫的关键因素。miRNAs在大多数植物中是高度保守的，但在少数的物种中也存在一些非保守的miRNAs。这类非保守miRNAs具有更广泛的靶基因，包括活性酶和生理蛋白，并适应多种逆境条件。如果能够利用好这类调节因子，则对于加快大豆耐盐品种育种进程具有重要意义。

发明内容

本发明提供了一种大豆gma-miR4359b基因、其表达载体、制备方法及其应用，该基因参与盐胁迫响应，在毛状根中过表达可以提高复合体大豆对盐胁迫抗性，在植物生长发育与盐胁迫应答过程中起到了重要作用，为大豆抵抗非生物胁迫提供理想候选基因。

为了达到上述目的，本发明提供了一种大豆gma-miR4359b基因，所述大豆gma-miR4359b基因的序列任选自如下(a)或(b)所述的序列之一：

(a)具有序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

(b)以序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列为核心构建的核苷酸序列。

本发明提供了一种含有上述技术方案所述的大豆gma-miR4359b基因的重组质粒，所述重组质粒是将上述技术方案所述的大豆gma-miR4359b基因插入pMD18-T表达载体得到的。

本发明提供了一种表达载体，以上述技术方案所述的重组质粒的DNA为模板、以gma-miR4359b-3301-F、gma-miR4359b-3301-R为引物扩增得到。

作为优选，所述gma-miR4359b-3301-F具体为：

5'-TTTCCATGGGATTTATTAACATCGGTTTTGGAC-3'；

所述gma-miR4359b-3301-R具体为：

5'-TTTAGATCTCAAATTAACTAATATCAAATAATTTATATAAATGTG-3'。

本发明提供了一种根据上述技术方案所述的大豆gma-miR4359b基因在培育抗干旱、耐高盐和/或耐ABA的转基因植物的应用。

本发明提供了一种根据上述技术方案所述的大豆gma-miR4359b基因在基因工程改善大豆耐盐性中的应用，过表达大豆gma-miR4359b基因能够显著提高大豆对盐胁迫抗性。