[发明专利]一种杜仲补天素丸的HPLC指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种杜仲补天素丸的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）对照品溶液的制备：分别称取没食子酸对照品、绿原酸对照品、甘草苷对照品、金丝桃苷对照品、毛蕊花糖苷对照品、淫羊藿苷对照品、丹皮酚对照品分别用甲醇定容；分别取没食子酸对照品溶液、绿原酸对照品溶液、甘草苷对照品溶液、金丝桃苷对照品溶液、毛蕊花糖苷对照品溶液、淫羊藿苷对照品溶液、丹皮酚对照品溶液，即得对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备：取杜仲补天素丸，粉碎，加甲醇溶解，超声提取，待冷却后补重，离心，取上清液后用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

（3）指纹图谱的制作：色谱条件：色谱柱：PntulipsBP-C18Plus色谱柱，5μm，4.6×250mm；流动相：0.2%磷酸水为A相，乙腈为B相；梯度洗脱，流速为1.0mL/min；检测波长为330nm；柱温为35℃；进样量为10μL；记录色谱图得到杜仲补天素丸的HPLC指纹图谱；所述梯度洗脱的程序是0～30min，95%→83%A；30～33min，83%→83%A；33～43min，83%→79%A；43～53min，79%→79%A；53～65min，79%→72%A；65～75min，72%→72%A；75～77min，72%→69%A；77～98min，69%→58%A；98～138min，58%→21%A；

（4）标准指纹谱图的确认：按照提供的上述方法，对多批次杜仲补天素丸建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较确定了22个共有峰，这些共有峰构成了杜仲补天素丸的指纹特征，作为杜仲补天素丸的标准指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的杜仲补天素丸的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤（1）是精密称取没食子酸对照品9.28mg放置于5mL量瓶、绿原酸对照品2.71mg放置于10mL量瓶、甘草苷对照品5.15mg放置于10mL量瓶、金丝桃苷对照品4.56mg放置于10mL量瓶、毛蕊花糖苷对照品4.48mg放置于10mL量瓶、淫羊藿苷对照品0.00218mg放置于1mL量瓶、丹皮酚对照品6.95mg放置于5mL量瓶用甲醇溶解并定容；分别取没食子酸对照品溶液0.51mL、绿原酸对照品溶液0.05mL、甘草苷对照品溶液0.14mL、金丝桃苷对照品溶液0.05mL、毛蕊花糖苷对照品溶液0.1mL、淫羊藿苷对照品溶液0.08mL、丹皮酚对照品溶液0.07mL置于1mL量瓶中，即得对照品溶液。

3.根据权利要求1所述的杜仲补天素丸的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤（2）是取杜仲补天素丸适量，粉碎，精密称定4g，加25mL甲醇溶解，超声提取60min，待冷却后补重，离心15min，取上清液后用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

4.根据权利要求1所述的杜仲补天素丸的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述22个共有峰中，以15号峰丹皮酚为参照峰，则1号峰为没食子酸，3号峰为绿原酸，6号峰为甘草苷，7号峰为金丝桃苷，8号峰为毛蕊花糖苷，14号峰为淫羊藿苷，15号峰为丹皮酚。