[发明专利]一种丙谷二肽的分离纯化方法

说明书

本发明提供了一种丙谷二肽的分离纯化方法，其包括以下步骤：向溶解于甲酸的丙谷二肽粗品中添加溶剂，所述溶剂包括氢氧化钠的醇溶液，待所述丙谷二肽粗品析晶完全后，降温后离心即可。使用本发明的分离纯化方法分离纯化丙谷二肽时，能够有效去除三肽、四肽、以及多肽杂质，所得丙谷二肽的收率高且纯度高，并且对设备和工艺环境要求较低，更适于工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种丙谷二肽的分离纯化方法。

背景技术

丙谷二肽(Alanyl Glutamine)，化学名为N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(见式1)，分子式：C₈H₁₅N₃O₄，分子量：217.15。本品为白色结晶性粉末；无臭无味；易溶于水、甲酸，不溶于乙醇、甲醇、丙酮和乙醚。

谷氨酰胺是一种条件必需氨基酸，是生物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶等的重要前体物质,也是蛋白质合成与分解的调节物。但谷氨酰胺本身由于不稳定、水溶性低而不能直接作为药物，只有将其转化为稳定的衍生物才能充分发挥谷氨酰胺对人体的作用。Peter Furst等发现丙氨酰谷氨酰胺(简称丙谷二肽)是谷氨酰胺理想替代品并于1995年将其开发为肠外营养用药。该药物具有促进肌肉蛋白合成、改善危重病人的临床与生化指标、维持肠道功能、保持机体氮平衡、增强免疫系统等作用，尤其在对大面积突发性创伤的病人具有重要的营养支持作用，目前在欧美等被广泛使用。

丙谷二肽的合成方法早期为化学合成法，但化学法合成，存在步骤较长，用到的化学试剂较多等问题，限制了其工业化应用。

近年来由于日本科学家Yokozeki和Hara等在酶技术上的突破(Yokozeki K.,HaraS.,Journal of Biotechnology,2005,115(02):211-220.)，采用酶法合成丙谷二肽能够直接以L-丙氨酸和L-谷氨酰胺为底物在酶催化的作用下一步合成丙谷二肽，与之前的化学合成法相比技术上，成本上、安全上都取得飞跃性突破，但是该技术路线会产生难以去除的三肽杂质丙氨酰丙氨酰谷氨酰胺、四肽杂质丙氨酰丙氨酰丙氨酰谷氨酰胺和其它多肽类杂质。在目前的工艺技术中大家多采用2～3倍体积水溶剂丙谷二肽粗品，再加入大量的甲醇进行除杂和精制。中国专利CN110407914A公开了一种丙谷二肽的分离提纯方法，即粗品溶解于3倍量的水中，再加入0.1～50％的酸性物质，30～80℃加热搅拌，加入6倍水量的甲醇析晶，65℃减压干燥得纯化的精制品，纯度最高达到99.83％，单个杂质小于0.1％。该技术使用了粗品12倍水量的甲醇，资源浪费较大，对设备和工艺环境要求较高，且除杂效果不佳。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中去除制备丙谷二肽时产生的三肽、四肽、以及多肽杂质时资源浪费较大从而成本较高、对设备和工艺环境要求较高且除杂效果不佳等缺陷，提供了一种丙谷二肽的分离纯化方法。使用本发明的分离纯化方法分离纯化丙谷二肽时，能够有效去除三肽、四肽、以及多肽杂质，所得丙谷二肽的收率高且纯度高，并且对设备和工艺环境要求较低，更适于工业化生产。

本发明人经过大量研究后意外发现，当采用甲酸作为丙谷二肽的良溶剂，以氢氧化钠的醇溶液进行析晶时，能够有效去除三肽、四肽、以及多肽杂质，且有效提高所得丙谷二肽的收率和纯度。此外，本发明还可进一步同时采用氢氧化钠的醇溶液和小极性溶剂(例如正庚烷等)的混合溶剂进行析晶，能够使得析晶效果更佳，从而能够大大减少相关溶剂的用量，从而降低成本。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种丙谷二肽的分离纯化方法，其包括以下步骤：向溶解于甲酸的丙谷二肽粗品中添加溶剂以使得所述丙谷二肽粗品进行析晶，所述溶剂包括氢氧化钠的醇溶液，待所述丙谷二肽粗品析晶完全后，降温后离心即可。