[发明专利]一种抗猪圆环病毒2型高免血清及其制备方法

权利要求书

1.一种制备抗猪圆环病毒2型高免血清的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）感染免疫：以保藏编号为 CGMCC No 3064的猪圆环病毒2型病毒DBN-SX07株的灭活疫苗为免疫原进行健康猪的感染免疫；

（2）采血：于免疫完成后28天检测血清抗体效价，当抗体效价达到1：2000以上时即为合格，采猪全血，备用；

（3）血清分离：将采集的猪全血进行恒温培养，经固液分离收集血清，备用；

（4）将收集的血清样品3000-4000rpm/min离心，5-30min并收集上清液，采用protein A亲和柱进行纯化，收集目的峰位置的纯化样品，即得。

2.根据权利要求1所述抗猪圆环病毒2型高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述免疫步骤具体包括：以猪圆环病毒2型病毒DBN-SX07株的完全弗氏佐剂疫苗进行颈部肌肉注射，免疫剂量为4.0ml/头；在免疫后21日以同样剂量和途径的弗氏不完全佐剂疫苗进行加强免疫1次。

3.根据权利要求2所述抗猪圆环病毒2型高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述猪全血培养的步骤包括先后于37℃放置1-2h的步骤，以及于2-8℃放置16-24h的步骤。

4.根据权利要求3所述抗猪圆环病毒2型高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述protein A亲和柱纯化步骤中，以结合缓冲液平衡系统并冲洗层析柱，以洗脱缓冲液线性梯度洗脱目的抗体；

所述结合缓冲液包括：3-5M NaCl、1.5-2M氨基乙酸，pH=9.0；

所述洗脱缓冲液包括：0.1-0.5M氨基乙酸，pH=3.0。

5.根据权利要求4所述抗猪圆环病毒2型高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，还包括在所述纯化样品中加入pH9.0的Tris-HCl缓冲液的步骤。

6.根据权利要求5所述抗猪圆环病毒2型高免血清的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述protein A亲和柱纯化步骤具体包括：将血清用PBS缓冲液稀释10倍，并置于4℃采用GE HiTrap^TMMabselect 5ml预装柱低速循环挂柱；挂柱结束后，采用Bio-Rad NGCTMChromatography System进行纯化；先用所述结合缓冲液进行平衡纯化系统并冲洗层析柱至基线平衡，然后使用所述洗脱缓冲液以5-10倍柱体积将B液从0%-100%线性梯度洗脱目的抗体，洗脱出峰后，分管收集各阶段洗脱液。

7.根据权利要求1-6任一项所述抗猪圆环病毒2型高免血清的制备方法，其特征在于，所述方法还包括将所述高免血清进行冻干的步骤，即将收集血清样品除菌，并加入冻干保护剂进行冻干处理，得到血清冻干产品。

8.根据权利要求7所述抗猪圆环病毒2型高免血清的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂包括明胶、蔗糖、海藻糖、甘露糖、小牛血清白蛋白中的一种或几种的混合物。

9.由权利要求1-8任一项所述方法制备的抗猪圆环病毒2型高免血清。