[发明专利]一株能同时裂解四种细菌的宽谱大肠杆菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用

说明书

本发明属于大肠杆菌噬菌体技术领域，尤其涉及一株能裂解四种细菌的宽谱大肠杆菌噬菌体分离物及其在杀菌和防菌中的应用。本发明主要公开了一株大肠杆菌噬菌体EC35P1（Escherichia coli phage EC35P1），保藏编号为CCTCC M 2020438。本发明的噬菌体是从自然界中分离获得的烈性噬菌体，经试验证明其对正常微生物菌群无毒害作用，且其DNA无法编码毒力基因，稳定性高；本发明的噬菌体宿主范围较广，除可裂解大肠杆菌外，还可裂解志贺氏菌、沙门氏菌、阴沟肠杆菌，且可实现大规模工业生产。该噬菌体为开发新型抗菌制剂提供了优良菌种资源，具有良好的应用开发前景。

技术领域

本发明属于大肠杆菌噬菌体的研发技术领域，尤其涉及一株能同时裂解四种细菌的宽谱大肠杆菌噬菌体、组合物及其应用。

背景技术

埃希氏大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，是人和动物肠道中的常居菌，可分为致病性和非致病性两大类。大肠杆菌的抗原成分复杂，可分为菌体抗原(O)、鞭毛抗原(H)和表面抗原(K)，根据菌体抗原的不同，可将大肠杆菌分为二百多个型，其中一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物具有致病性，尤其对婴儿和幼畜，常引起严重腹泻和败血症。大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经 60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。大肠杆菌在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中则存活更久。

禽大肠杆菌病是一种条件性疾病，在卫生条件差、饲养管理不良的情况下，很容易造成此病的发生。禽大肠杆菌病是由埃希氏大肠杆菌引起的多种病的总称，包括大肠杆菌性肉芽肿、腹膜炎、输卵管炎、脐炎、滑膜炎、气囊炎、眼炎、心包炎、肝周炎、卵黄性腹膜炎等疾病，对禽类养殖业危害严重。

沙门氏菌属肠杆菌科，为革兰氏染色阴性杆菌，绝大多数有鞭毛并能运动。按照考夫曼―怀特的分类，已确认的沙门氏菌属有2000多个血清型，根据沙门氏菌抗原结构的不同，可将其分为A、B、C、D、E……等34个组。引起人类疾病的沙门氏菌绝大多数属于A～E组，其中主要有猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠类沙门氏菌、鸡沙门氏菌、鸭沙门氏菌等10多个血清型。在自然界中，沙门氏菌有广泛的动物寄主：鸡、鸭、鹅等家禽和猪、牛、羊、马等家畜，以及各种兽类、鱼类、鼠类均可带菌，甚至从蝉及某些昆虫中也可分离出沙门氏菌。由于沙门氏菌存在于这些动物寄主的肠腔内，因此在家禽家畜屠宰、加工过程中其肉均可感染沙门氏菌；患病动物屠宰后直接出售更易传播沙门氏菌，蛋类或蛋制品同样可遭沙门氏菌污染。

禽沙门氏菌病是由沙门氏菌属种的一种沙门氏菌所引起的禽类的急性或慢性疾病的总称。由鸡白痢沙门氏菌所引起疾病的称为鸡白痢；由鸡伤寒沙门氏菌引起的疾病称为禽伤寒；由其他有鞭毛能运动的沙门氏菌所引起的禽类疾病则统称为禽副伤寒。禽沙门氏菌病在世界各地普遍存在，严重危害禽类养殖业的发展。据报道，一些沙门氏菌携带具耐药因子的遗传质粒，耐药因子可传递对多种抗生素的耐药性，尤其可在敏感细菌中散播，给治疗沙门氏菌感染造成困难。

阴沟肠杆菌是肠杆菌目肠杆菌科肠杆菌属的一种细菌，广泛存在于自然界中，在人和动物的粪便水、泥土、植物中均可检出，是肠道正常菌种之一。阴沟肠杆菌已成为医院感染越来越重要的病原菌，其引起的细菌感染性疾病，常累及多个器官系统，包括皮肤软组织感染、泌尿道感染呼吸道感染以及败血症等。由于阴沟肠杆菌可产生具致病性的细菌内毒素，同时该菌对消毒剂及抗生素具有强烈的耐药性。据报道，阴沟肠杆菌可引起肉雏鸡发病并导致死亡。

志贺氏菌，又称痢疾杆菌，是一类革兰氏阴性菌。该菌耐寒，能在普通琼脂培养基上经过24小时生长，形成直径达2mm大小、半透明的光滑型菌落；志贺氏菌在肠道杆菌选择性培养基上则形成无色菌落，大小为0.5～0.7×2～3μ m。志贺氏菌无芽胞，无荚膜，无鞭毛，多数有菌毛。志贺氏菌是人类和灵长类动物的肠道致病菌，可引起细菌性痢疾。此外，有学者发现志贺氏菌可感染雏鸡，导致其大批发病和死亡，其发病率可达100％,用药后死亡率仍达 31.84％～33.13％,给养鸡业造成了较大经济损失。