[发明专利]一种脂蛋白(a)测定试剂盒及其检测方法

说明书

本发明一种脂蛋白(a)测定试剂盒，包括试剂1和试剂2，所述试剂1由以下质量浓度的组分组成：缓冲液、无机盐、表面活性剂、稳定剂、防腐剂、抗干扰剂、所述试剂2由以下质量浓度的组分组成：缓冲液、表面活性剂、稳定剂、封闭剂、脂蛋白(a)单抗乳胶颗粒、防腐剂。本发明试剂盒通过在试剂1中添加抗干扰剂，提高了脂蛋白(a)胶乳免疫比浊法试剂的抗干扰能力、分析灵敏度及精密度，且未提高试剂研发成本，更易适应现代化临床检验医学的发展。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种脂蛋白(a)测定试剂盒及其检测方法。

背景技术

脂蛋白(a)【Lipoprotein(a)，简称Lp(a)】，是一种富含胆固醇的特殊血浆脂蛋白，是1963年由挪威遗传学家Berg在制备低密度脂蛋白(LDL)抗体的过程中首先发现的特殊大分子脂蛋白，随后并将其命名为脂蛋白(a)。20世纪80年代末，人们发现脂蛋白(a)与动脉粥样硬化有关，与此同时，Mclean发现脂蛋白(a)与纤溶酶原(Plasminogen，PLG)的结构具有高度同源性。

肝脏是脂蛋白(a)合成的主要场所，其主要的生理功能是阻止血管内血块溶解，病理上可促进动脉粥样硬化心脑血管病、急性心肌梗死、家族性高胆固醇血症、糖尿病、大动脉瘤及某些癌症等形成。脂蛋白水平持续升高与心绞痛、心肌梗死、脑溢血有密切关系，是脑卒中和冠心病的独立危险因子，其减低通常见于肝脏疾病、酗酒、摄入新霉素等药物后。

脂蛋白(a)的核心部分由甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯等脂质和载脂蛋白B100组成，结构类似低密度脂蛋白(LDL)，但其含有一个独特的Apo(a)，后者在其它任何脂蛋白中都不存在。

脂蛋白(a)的浓度主要取决于其合成速率，而与分解速率基本无关。据有关资料显示，脂蛋白(a)浓度的个体差异大，在人群中呈偏态分布，低者为不能检测(定性为阴性，定量测定为零)，高者为显著高值(可达1000mg/L以上)，这种差异最主要由Apo(a)基因位点决定。但在同一个体内，水平保持相对稳定。各种方法测脂蛋白(a)所得参考范围大致相近，目前国内外所采用的判断标准基本相同：一般认为300mg/L为临界水平，大于300mg/L以上作为病理性增高。

早期检测脂蛋白(a)多用电泳法，观察β和前β脂蛋白之间是否出现额外的脂蛋白(a)区带，但此法灵敏度低，多用于定性检测。随后相继研制开发出一些直接测定脂蛋白(a)的免疫化学检测法，如辐射状免疫扩散法(RID)、电免疫扩散法(EID)、放射免疫测定法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫浊度法【包括免疫散射比浊法(INA)和免疫透射比浊法(ITA)】、解离增强配体荧光免疫测定法(DELFIA)等。

辐射状免疫扩散法与电免疫扩散法因操作简便，不需特殊仪器，仍有一些基层单位实验室采用，但缺点是灵敏度低。放射免疫测定法，由于试剂保存时间短、自动化程度低，同时会造成放射性物质环境污染，基本已被淘汰。解离增强配体荧光免疫测定法因需特殊仪器，国内也较少应用。

目前国内临床实验室最常用的方法为酶联免疫吸附试验(ELASA)法与免疫浊度法(INA、ITA)。酶联免疫吸附试验法虽然在临床上使用了近二十年，但是其精密度相对较低、操作复杂且耗时长，自动化程度低；免疫浊度法，又可分为散射比浊(INA)和透射比浊(ITA)，这类方法的优点是快速简便，精密度高、易于自动化、适于大批量标本的同时检测，缺点是抗体用量大(为ELISA)的数倍，对抗体要求高(应具有高特异性、高滴度和高亲和力)。

免疫浊度法可分为散射比浊(INA)与透射比浊(ITA)。散射比浊(INA)法由于其光波接收方式的特点，通常测试结果的灵敏度与测速要优于透射比浊，但需要专门仪器的散射比浊仪或特种蛋白仪，与专用配套试剂，测定成本较高，不易于在基层医院中推广使用。透射比浊(ITA)法，操作简便适用性强，普通自动生化分析仪和分光光度计均可使用，更易于被常规分析所采用，几乎所有的各实验室、基层医院均能开展，不足的是灵敏度和精密度、抗干扰力均不够理想。