[发明专利]一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样本，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为达泊西汀的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为2～1000ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中达泊西汀的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法。

背景技术

达泊西汀适用于治疗符合下列所有条件的18至64岁男性早泄(PE)患者：(1)阴茎在插入阴道之前、过程当中或者插入后不久，以及未获性满足之前仅仅由于极小的性刺激即发生持续的或反复的射精；(2)因早泄(PE)而导致的显著性个人苦恼或人际交往障碍；(3)射精控制能力不佳。

达泊西汀治疗早泄的作用机制可能与其抑制神经元对5-羟色胺的再吸收，从而影响神经递质作用于细胞突触前后受体的电位差有关。

人类的射精主要由交感神经系统介导。射精的反射通路来源于脊髓反射中心，该通路由脑干介导，而该反射中心最初会受到许多脑核(内侧视前核和下脑室旁核)的影响。在大鼠中，达泊西汀通过作用于脊椎上水平抑制射精驱动反射，其中外侧巨细胞旁核(LPGi)是一个必要的脑部结构。支配精囊、输精管、前列腺、尿道球部肌肉和膀胱颈的神经节后交感神经纤维可使上述器官协同收缩以实现射精。达泊西汀可以调节大鼠的这种射精反射，从而延长阴部运动神经元反射放电(PMRD)的潜伏期，并减少PMRD的持续时间。

目前，现有关于达泊西汀测定方法的速度、精度、灵敏度、选择性均有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法，该方法可提高检测的灵敏度、精度、选择性和速度。

为实现上述目的，本发明提供一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法，血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以达泊西汀-d7为内标；于96深孔板中精密加入50μL的血浆样本，加入15μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入15μL的0.03ng/μL的内标达泊西汀-d7溶液，混匀后加入500μL的混合有机溶剂Ⅰ于96深孔板中，涡旋混合10min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液100μL至装有500μL混合有机溶剂Ⅱ的96深孔板中，混合有机溶剂Ⅰ为乙腈：甲酸按照体积比100：0.1混合得到的混合物，混合有机溶剂Ⅱ为水：乙腈：甲酸按照体积比75：25：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；

(2)试样测定：

取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中达泊西汀和内标达泊西汀-d7的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的达泊西汀浓度。

液相色谱测定条件为：色谱柱为InfinityLab Poroshell 120EC-C18，2.7-Micron，柱规格为3.0×50mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积百分比100：0.1：0.2混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸按照体积百分比100：0.1：0.2混合得到的混合物；洗液为甲醇：水按照体积百分比90：10混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.5mL/min，进样量为10μL，分析时间3min；