[发明专利]一种野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂

权利要求书

1.一种野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂，其特征在于：由冷冻基础液、荷叶提取物和绞股蓝多糖组成，所述荷叶提取物由包括如下步骤的方法制备得到：

1)称取新鲜荷叶和干荷叶，并分别进行粉碎，将得到的新鲜荷叶碎和干荷叶碎用纤维素酶预处理1-2h；

2)分别将预处理后的新鲜荷叶碎和干荷叶碎按照料液比1:5-10加入到高浓度乙醇溶液中常温浸泡3-6h，同时进行超声处理；

3)之后分别向浸泡有新鲜荷叶碎和干荷叶碎的溶液中加入纯化水，使料液比达到1：20-30，常温下，超声处理6-12h；

4)将处理后的溶液浸提、减压浓缩后冻干，粉碎，得到新鲜荷叶提取物和干荷叶提取物备用；

5)将新鲜荷叶提取物和干荷叶提取物按照重量份数比0.5-2:1混合得到荷叶提取物。

2.根据权利要求1所述的野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂，其特征在于：所述冷冻基础液、荷叶提取物和绞股蓝多糖的重量份数比为90-120:0.5-1:0.05-0.1。

3.根据权利要求1或2所述的野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂，其特征在于：所述冷冻基础液、荷叶提取物和绞股蓝多糖的重量份数比为100:0.8:0.06。

4.根据权利要求1所述的野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂，其特征在于：每1000ml冷冻基础液中含有葡萄糖1-1.5g、甘油5-10ml、柠檬酸1.2-1.6g、甘氨酸0.3-0.6g、咖啡因20-50mg。

5.一种如权利要求1-4任一项所述的野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

1)称取新鲜荷叶和干荷叶，并分别进行粉碎，将得到的新鲜荷叶碎和干荷叶碎用纤维素酶预处理1-2h；

2)分别将处理后的新鲜荷叶碎和干荷叶碎按照料液比1:5-10加入到高浓度乙醇溶液中常温浸泡3-6h，同时进行200-300W超声处理；

3)之后分别向浸泡有新鲜荷叶碎和干荷叶碎的溶液中加入纯化水，使料液比达到1：20-30，常温下，200-300W超声处理6-12h；

4)将处理后的溶液浸提、减压浓缩后冻干，粉碎，得到新鲜荷叶提取物和干荷叶提取物备用；

5)将新鲜荷叶提取物和干荷叶提取物按照重量份数比0.5-2:1混合得到荷叶提取物，并将荷叶提取物放置在0-4℃储存备用；

6)将配方量葡萄糖、甘油、柠檬酸、甘氨酸、咖啡因溶于纯化水中，得到冷冻基础液；之后向冷冻基础液中加入荷叶提取物和绞股蓝多糖混匀，并使用0.2-0.5μm的过滤器过滤得到冷冻保护剂；

7)将过滤得到的冷冻保护剂在低温环境下保存备用。

6.根据权利要求5所述的野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂，其特征在于：所述高浓度乙醇的质量浓度为90-95％。

7.根据权利要求5所述的野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂，其特征在于：所述步骤3)中，超声处理之后进行过滤，向过滤后的荷叶碎中添加质量浓度为20-35％的乙醇溶液，料液比为1:20-30，并再次用超声处理3-8h。