[发明专利]一种黄荆试管苗快速繁殖方法

权利要求书

1.一种黄荆试管苗快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：黄荆外植体的准备及无菌系的建立

步骤2：黄荆外植体愈伤组织诱导

将步骤1截取好的无菌外植体接种于诱导培养基上，该诱导培养基配方为：基础培养基为MS，添加0.2～0.6µMNAA，0.5～1.5µM TDZ，添加30g/L蔗糖，9g/L琼脂，pH为5.8；培养温度为25±2℃，光照12 h•d-1，光强2000lx，观察其愈伤组织的诱导情况；

步骤3：黄荆愈伤组织不定芽的增殖

将诱导培养基上没有发生褐变和污染的愈伤组织转接至分化培养基上，该分化培养基配方为：基础培养基为MS，添加0.8～1.2µM6-BA，0.3～0.7µM NAA，添加30g/L蔗糖，9g/L琼脂，pH为5.8；培养温度为25±2℃，光照12 h•d-1，光强2000lx，观察其不定芽增殖情况；

步骤4：黄荆试管苗的生根

将诱导分化出的试管苗切成2～3cm，接种于1/2MS生根培养基上，在培养基中分别添加1.0～1.5mg/L IAA，1.0～1.5 mg/L IBA，添加20g/L蔗糖，7g/L琼脂，pH为5.8；培养温度为25±2℃，光照12 h•d-1，光强2000lx；

步骤5：黄荆生根试管苗的移栽

待试管苗根长2 cm～4cm时，在温室自然光下打开瓶盖炼苗2d～3d，然后将瓶苗小心地取出，洗净根部残留的培养基，即可进行移栽；

在上述步骤1中，黄荆外植体的准备过程如下：

选长4cm～8cm长的较嫩的黄荆枝条，用剪刀将腋芽两侧的叶柄去除，留下只剩腋芽的茎段；

在上述步骤1中，黄荆外植体无菌系的建立过程如下：

（1）将准备的黄荆外植体用浓度为5%的洗衣粉水浸泡5min后，用自来水将外植体洗干净，置于流水下冲洗60min；

（2）接着在超净工作台用浓度70%的酒精浸泡5S，无菌水冲洗3遍，再用0.1%的HgCl2 溶液消毒4min，无菌水冲洗5次，每次1min；

（3）将完成消毒的外植体置于铺有已灭菌的滤纸的无菌培养皿中，用解剖刀截取无菌的黄荆枝条的腋芽部分，每段长0.5 cm～1cm。

2.在根据权利要求1所述的一种黄荆试管苗快速繁殖方法，其特征在于，在步骤S2中，诱导培养基的配方为MS+1.5µM TDZ+0.6µMNAA+30g/L蔗糖+9g/L琼脂，pH为5.8。

3.根据权利要求1所述的一种黄荆试管苗快速繁殖方法，其特征在于，在步骤S3中，分化培养基配方为MS+1.2µM6-BA +0.6µM NAA+30g/L蔗糖+9g/L琼脂，pH为5.8。

4.根据权利要求1所述的一种黄荆试管苗快速繁殖方法，其特征在于，在步骤S4中，生根培养基配方为1/2MS+1.2mg/L IAA +1.2 mg/L IBA+20g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH为5.8。