[发明专利]一种植物原生质体单细胞悬液的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种植物原生质体单细胞悬液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取45~55mg的植物组织切成1mm³的薄片，置于10mL的离心管中，向其中加入5mL的清洗液，摇晃混匀，静置10~15s，除去上清液，制得组织薄片；

S2、向步骤S1制得的组织薄片中加入5mL的酶消化液，于30℃下避光孵育0.5~1h，镜检至消化完全，制得酶解消化液；

S3、将步骤S2制得的酶解消化液用1mL的宽口枪头转移，通过细胞筛，并向其中加入4mL清洗液，混匀，经离心处理，去掉上清液，用宽口枪头加入2mL清洗液重悬原生质体并离心，连续处理2次，去掉上清液，制得细胞沉淀；

S4、将步骤S3制得的细胞沉淀经除菌混合液清洗2~3次，离心去除上清液，将细胞沉淀用清洗液溶解，并用显微镜细胞计数板和台盼蓝染色检测细胞浓度、活性，即可；步骤S2所述的酶消化液由0.5M甘露醇、质量分数为15%的纤维素酶、质量分数为1%的果胶酶及质量分数为3%的离析酶组成；步骤S4所述的除菌混合液由如下组分及其质量百分数组成：穿心莲提取物3~8%，雷公藤提取物2~3%，甘草提取物8~15%，纯化水74~87%。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1、S3及S4所述的清洗液为含质量百分数为0.04%的牛血清白蛋白的甘露醇0.4M。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3所述的细胞筛孔径大小为40μm，所述的离心处理过程为于4℃，400~600rpm转速下离心4~8min。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S4所述的离心过程为于4℃，400~600rpm转速下离心2~5min。

5.一种权利要求1所述的制备方法在构建单细胞转录组文库中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，将利用权利要求1制备的单细胞悬液置于冰上，于30min内建库。