[发明专利]一种抗纹枯病玉米品系育种方法

说明书

本发明公开了一种抗纹枯病玉米品系的育种方法。所公开的方法包括对玉米ZmDREB1A基因进行变异处理得到抗纹枯病玉米品系。发明人发现并鉴定了玉米ZmDREB1A(GRMZM2G124037)基因突变体提高了玉米植株的抗病性，表明ZmDREB1A基因对玉米抵抗R.Solani起着至关重要的作用。

技术领域

本发明涉及ZmDREB1A基因突变体的育种应用，具体涉及通过玉米ZmDREB1A突变体提高玉米抗纹枯病的应用。

背景技术

CBF家族转录因子CBF1，CBF2和CBF3(分别为DREB1B，DREB1C和DREB1A)在调节植物抵抗冷冻胁迫中发挥重要作用，被低温诱导并调节下游抗冷相关基因的表达，以玉米GRMZM2G124037(ZmDREB1A)基因(序列如SEQ ID NO:1所示，其编码的蛋白序列如SEQ IDNO:2所示)为例，其在调节植物抵抗冷冻胁迫中有相关作用。

发明内容

本发明发现并鉴定了玉米GRMZM2G124037基因(ZmDREB1A)突变体可增强玉米抗纹枯病的能力。

基于此，本发明提供了一种抗纹枯病玉米品系的育种方法。所提供的方法包括对玉米ZmDREB1A基因进行变异处理得到抗纹枯病玉米品系。

可选的方案是，所述变异处理包括降低玉米ZmDREB1A基因的表达量。

可选的方案是，所述变异处理包括在玉米ZmDREB1A基因转录起始位点上游-33bp处插入Mutator 3转座子。

具体的，所述Mutator 3转座子插入序列SEQ ID NO:3所示。

具体的，所述的玉米ZmDREB1A基因序列如SEQ ID NO:1、4或5所示。

具体的，将W22自交系玉米ZmDREB1A基因进行变异获得抗纹枯病玉米品系。

附图说明

图1为实施例中玉米zmdreb1a突变体鉴定；图1A为ZmDREB1A基因结构及Mutator插入位点，黑色框表示编码序列，白色框表示5’UTR和3’UTR；图1B为PCR鉴定NS及zmdreb1a突变体，引物位置在图1A标注；图1C为RT-PCR鉴定ZmDREB1A的mRNA表达水平，ZmGAPDH为内参；图1D为Western blot鉴定ZmDREB1A的蛋白表达水平，ZmGAPDH为内参；NS，zmdreb1a自交分离野生型；zmdreb1a，ZmDREB1A突变体；

图2zmdreb1a突变体接种R.Solani表型鉴定；图2A为zmdreb1a纯合突变体和NS接种R.Solani 10天后第二片叶表型；图2B为zmdreb1a突变体接种R.Solani 10天后第二片叶电导率测定，数据表示均值±标准误(3-10个生物学重复)，*表示NS与zmdreb1a之间差异显著(Student’s T-test，p0.05)。

具体实施方式

除非另有说明，本文中的术语根据相关领域技术人员的常规认识理解。

以下是发明人提供的具体实施例，以对本发明的技术方案做进一步解释说明。

实施例：

该实施例中发明人获得并鉴定了一个转座子插入zmdreb1a突变体，该突变体抗纹枯病。

该实施例中所用试剂为市售产品；

所用引物序列如下，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；

MU25:CTTCGTCYATAATGRCAATTATCTC；

R2a:TCCACGAGCAACCCTTCC；

F1a:CTGCACAGCATAAATTCTCCAG；