[发明专利]一种快速筛选抗癌靶点药物的方法

权利要求书

1.一种快速筛选抗癌靶点药物的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

步骤一、获得目标细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物的全基因序列，并将目的菌株的基因组序列剪切成含重叠区的核酸小片段，并且将获得的非命中核酸序列与含重叠区的核酸小片段进行比对，获得非命中核酸序列；

步骤二、该非命中核酸列即为可能的目标细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物的菌株特异性核酸片段，最后分别以目标细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物菌株的基因组DNA和获得的核酸池为模板，设计的引物进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖电泳检测；

步骤三、将步骤二中两种扩增产物分别稳定转染入适合高通量筛选的胚胎干细胞中，并且经过多次有限稀释，获取高纯度和高表达效率的FRT细胞模型；

步骤四、将含有蛋白和胶体金的缓冲液进行第一次反应，得到反应液1；在反应液1中添加巯基己醇己酸酯进行第二次反应，得到反应液2；将反应液2进行分离，得到蛋白酶筛选底物；

步骤五、进行目的片段的复制，构建含有目的片段的甘露聚糖酶基因，根据基因的序列进行启动子的生物信息学分析，找到该基因的转录起始位点，并预测其启动子区，加质量百分比为76％的乙醇2ml，用这些乙醇冲洗管壁直至混匀，去除上清液，利用细胞核提取物和回收纯化后浓缩的目的片段进行牛MYOD1基因启动子区的转录因子结合位点的筛选实验；

步骤六、实验结束后，对实验结果进行分析处理，即完成了基因启动子区转录因子结合位点的多通量筛选。

2.根据权利要求1所述的一种快速筛选抗癌靶点药物的方法，其特征在于：在转速为11000-13000rpm/min的条件下，离心4-6min的条件下进行上清液的去除。

3.根据权利要求1所述的一种快速筛选抗癌靶点药物的方法，其特征在于：琼脂糖电泳检测时采用聚丙烯酰胺凝胶为载体，该聚丙烯酰胺凝胶可以分离小片段5-500bpDNA，采用Tris·醋酸(TAE)、Tris·硼酸(TBE)和Tris·磷酸(TPE)3种缓冲体系，且电泳的最适离子强度一般在0.02-0.2之间。

4.根据权利要求1所述的一种快速筛选抗癌靶点药物的方法，其特征在于：所述蛋白酶选用丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶中任意一种。

5.根据权利要求1所述的一种快速筛选抗癌靶点药物的方法，其特征在于：所述蛋白酶按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调PH到7.2左右)或PBS(D-hanks)液中，搅拌混匀，置于4℃内过夜。

6.根据权利要求1所述的一种快速筛选抗癌靶点药物的方法，其特征在于：将蛋白酶中配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌，然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。

7.根据权利要求1所述的一种快速筛选抗癌靶点药物的方法，其特征在于：胶体金在弱碱环境下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，且此种结合为静电结合。

8.根据权利要求1所述的一种快速筛选抗癌靶点药物的方法，其特征在于：胶体金在制备时用容量瓶量取300ml超纯水加入到600ml锥形瓶中，将锥形瓶置于磁力加热搅拌器加热板上，放入磁力搅拌子，打开搅拌旋钮至适当速度。