[发明专利]PEAR1基因突变试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及PEAR1基因突变试剂盒及其应用，所述试剂盒中包括TALEN内切酶或者编码TALEN内切酶的质粒。本发明的PEAR1基因突变试剂盒能够成功地对PEAR1基因进行突变，通过突变能够降低PEAR1蛋白活性，通过降低PEAR1蛋白活性，有助于提高肺栓塞的存活率。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及PEAR1基因突变试剂盒及其应用。

背景技术

血小板内皮聚集受体1(platelet endothelial aggregation receptor-1,PEAR1)是一种含有1034个氨基酸的跨膜蛋白，主要在巨核细胞、血小板和内皮细胞上表达。PEAR1在细胞外含有EMI结构域(蛋白-蛋白相互作用区域)，15个类似表皮生长因子的重复序列及胞质内多个酪氨酸和脯氨酸残基组成。

基于人群的多项研究中，多个独立的研究发现PEAR1基因可调控血小板功能并参与血栓相关事件的发生。其中多个全基因组关联研究(Genome-Wide-Association-Studies,GWAS)发现PEAR1基因突变可影响血小板的聚集能力。Juraj Sokol等人研究发现PEAR1单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNPs)可增加粘性血小板综合征的发病率，另一项研究纳入101例肺栓塞患者和匹配的132例健康人群，发现PEAR1基因rs778026543突变在肺栓塞患者与健康人群之间存在显著性差异。而在动物水平的研究中，Maarten等人通过PEAR1基因敲除小鼠实验，发现硫酸葡聚糖可以直接在体外活化PEAR1引起浓度依赖的血小板聚集，但是在体内的尾出血及静脉血栓中PEAR1基因未体现明显区别。其PEAR1基因敲除小鼠采用国际小鼠表型联盟基于C57BL/6N为背景的PEAR1基因敲除小鼠Pear1^{tm1a(KOMP)Wts}，其使用Cre/loxP和Flp/FRT系统敲除PEAR1基因的7号和8号外显子构成PEAR1基因移码敲除小鼠模型，如图1所示。因此目前尚未有PEAR1基因突变的体外模型可以模拟人群中PEAR1基因突变对于血栓性疾病的作用。

发明内容

为了对PEAR1基因进行突变以及提供一种治疗肺栓塞的药物试剂盒，本发明提供PEAR1基因突变试剂盒及其应用。具体而言，为了实现本发明的目的，本发明拟采用如下的技术方案：

本发明一方面涉及PEAR1基因突变试剂盒，所述试剂盒中包括TALEN内切酶或者编码TALEN内切酶的质粒，所述TALEN内切酶的靶点位置选自下述PEAR1-T1和/或PEAR1-T4；

PEAR1-T1：

TCACCACGACCACTAAGG agtcccacctgcgcccctt CAGCCTGCTCCCAGCTG A；

PEAR1-T4

TGGACTCCCGCCCACGC ctgcagtgctgtagg GGTTACTACGAGAGCAGA。

在本发明的一个优选实施方式中，所述PEAR1基因突变是指在TGCGCCCTTCAG前缺失两个碱基CC或缺失11个碱基TCCCACCTGCG。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的试剂盒还包括基因突变成功的鉴定引物组，所述引物组包括：

PEAR1-sens：TGAGTACTGATTCTCTCCATGGTG；

PEAR1-anti：AACTGAAGGAGCAGACAGTAGC。

本发明另一方面还涉及上述试剂盒在制备PEAR1基因突变小鼠中的应用。

本发明另一方面还涉及一种治疗肺栓塞的药物试剂盒，所述试剂盒包括上述PEAR1基因突变试剂盒以及治疗肺栓塞的药物。优选地，所述治疗肺栓塞选自替格瑞洛、氯吡格雷、利伐沙班、达比加群、阿哌沙班抗血栓药中的一种或者多种。