[发明专利]培养诱导造血干细胞分化为巨核系细胞的补液培养基及方法

说明书

本发明提出了诱导造血干细胞分化为巨核系细胞的补液培养基及方法。所述培养基包括：基础培养基；血小板生成素；重组人干细胞因子；白介素‑3；白介素‑6；泊洛沙姆188；芳香烃受体拮抗剂；粒细胞巨噬细胞集落刺激生长因子；白介素‑11以及氨基酸。本发明的补液培养基可以更好地促进造血干细胞分化为巨核系细胞，提高分化效率、巨核系细胞的得率和活性，具有广泛地应用前景。

技术领域

本发明涉及生物工程领域。具体地，本发明涉及诱导造血干细胞分化为巨核系细胞的补液培养基及方法。

背景技术

血小板是由骨髓中成熟的巨核细胞胞浆发育产生，具有凝血、保护毛细血管的功能，血小板异常可导致出血性疾病。近年来肿瘤发病率逐年升高，放、化疗是肿瘤治疗的常用手段，常伴有血小板减少症状，临床上以输注血小板作为主要治疗手段，但供血紧张、或反复输注血小板无效等原因，促使人们探寻新的血小板来源。造血干细胞能够在体外分化为巨核祖细胞，并逐渐成熟生血小板，为人们提供新的思路。由于脐血易获得、对人体无害、免疫原性低而成为人们研究的首选材料。

然而，目前的促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的体系还存在增殖能力弱、诱导分化效率低等问题。因此，仍需要研究。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出了一种诱导造血干细胞分化为巨核系细胞的补液培养基及方法，利用该补液培养基可以更好地促进造血干细胞分化为巨核系细胞，提高分化效率、巨核系细胞的得率和活性，具有广泛地应用前景。

为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种诱导造血干细胞分化为巨核系细胞的补液培养基。根据本发明的实施例，所述补液培养基包括：基础培养基；血小板生成素；重组人干细胞因子；白介素-3；白介素-6；泊洛沙姆188；芳香烃受体拮抗剂；粒细胞巨噬细胞集落刺激生长因子；白介素-11；以及氨基酸。发明人发现，在培养过程中，添加有粒细胞巨噬细胞集落刺激生长因子(GM-CSF)、白介素-11(IL-11)和氨基酸的补液培养基可以更好地促进造血干细胞分化为巨核系细胞，提高巨核系细胞的得率。

根据本发明的实施例，所述血小板生成素的浓度为10～200ng/mL，优选80～120ng/mL。

根据本发明的实施例，所述重组人干细胞因子的浓度为10～200ng/mL，优选80～120ng/mL。

根据本发明的实施例，所述白介素-3的浓度为5～60ng/mL，优选10～50ng/mL。

根据本发明的实施例，所述白介素-6的浓度为10～200ng/mL，优选80～120ng/mL。

根据本发明的实施例，所述泊洛沙姆188的浓度为0.2～3mg/mL，优选0.5～1.5mg/mL。

根据本发明的实施例，所述芳香烃受体拮抗剂的浓度为0.2～10μM，优选0.5～1.5μM。

根据本发明的实施例，所述粒细胞集落刺激生物因子的浓度为10～60ng/mL，优选20～40ng/mL。

根据本发明的实施例，所述白介素-11的浓度为10～100ng/mL，优选40～60ng/mL。

根据本发明的实施例，所述基础培养基选自stemspan无血清培养基。

根据本发明的实施例，所述氨基酸选自半胱氨酸、天冬氨酸和丝氨酸中的至少一种。

根据本发明的实施例，所述半胱氨酸的浓度为20～200μM，优选60～100μM。

根据本发明的实施例，所述天冬氨酸的浓度为50～500μM，优选200～400μM。

根据本发明的实施例，所述丝氨酸的浓度为100～1200μM，优选600～800μM。