[发明专利]含有特异性分子靶标的空肠弯曲菌标准菌株及其检测和应用

说明书

本发明提供了3株空肠弯曲菌，所述菌株346‑1C保藏号为GDMCC 60857，菌株3853‑1A的保藏号为GDMCC 60858，菌株542‑1A的保藏号为GDMCC 60859；同时还提供了分别用于检测3株特异性空肠弯曲菌的特异性分子靶标，所述分子靶标包括如SEQ ID NO:1～3所示的核苷酸序列。所述菌株具有标准的空肠弯曲菌菌体显微形态和生理生化特征，可用于检验空肠弯曲菌显色平板的准确性，以及相关试剂验证的标准菌株。本发明还提供了一种冻干保护剂，具有成型好，外观漂亮且水溶性好，1‑2秒内能够完全溶解；在‑20℃条件下可以保存至少一年以上，能够保证其数量级不发生变化，可用于长期储存质控菌株。

技术领域

本发明属于微生物检验技术领域，具体涉及检测空肠弯曲菌特异性分子靶 标以及含有该靶标的标准菌。

背景技术

腹泻性疾病是世界范围内的一个重要公共卫生问题，每年因感染性腹泻死 亡的人数超过200万，而在发展中国家，每年因腹泻性疾病死亡的人数高达1000 万，给全球公共卫生行业造成了巨大经济损失，也给人民的生命健康构成了重 要威胁。空肠弯曲菌是一种人畜共患病病原菌，可以引起人和动物发生多种疾 病，并且是一种食物源性病原菌，被认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要 原因。空肠弯曲菌广泛存在肉与肉制品中，尤其是禽肉中，是我国常见重要的 食源性致病菌。空肠弯曲菌的致病机理以及其致病因素包括粘附、侵袭、产生 毒素和分子模拟机制等四个方面，通过分子模拟机制可以引起最严重的并发症 一格林一巴利综合征。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素 和细胞致死性膨胀毒素而致病。了解该菌的流行特征及遗传进化是有效防控该 菌所致的食源性疾病的基础，而是否使用了合适的标准菌株决定了研究结果的 可靠性，目前空肠弯曲菌的标准菌株主要来源美国的美国微生物菌株保藏中心 (American Type CultureCollection，ATCC)，我国医学微生物菌种中心(CMCC)并没有保存空肠弯曲菌。

2015年5月1日后，我国食品中空肠弯曲菌检验主要执行 GB/T4789.9—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验》国 家标准。空肠弯曲菌的鉴定主要采用传统的生化鉴定方法。主要通过氧化酶、 过氧化氢酶、马尿酸盐水解和吲哚乙酸酯水解试验，进而确认是否为空肠弯曲 菌。目前，我国仍缺乏代表性的食品分离株作为标准对照菌株，现用标准菌株 大部分源于ATCC，ATCC的标准菌株一般是从临床上分离得到的，与食源性空 肠弯曲菌菌株在致病能力和基因型都不同，且与中国分离得到的菌株在性状上 有所差别，不能代表所有空肠弯曲菌的特性，更不能代表中国空肠弯曲菌的特 征，尤其是食源性空肠弯曲菌。在中国CMCC网站上不能检索到弯曲菌属的任 何菌株，具有中国本土来源的标准菌株资源十分缺乏，具有食品源的菌株更是 缺乏，因此，构建国内具有代表性的空肠弯曲菌标准菌株是十分有必要的。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了3株空肠弯曲菌中国地区的食品分离 菌株，该菌株具有典型的空肠弯曲菌生理生化特性，且能较好地反映该菌在中 国地区的遗传背景，能弥补中国地区无食源性空肠弯曲菌标准菌株可用的空缺。 空肠弯曲菌菌株346-1C是分离于中国杭州市万寿亭农贸市场的鸽子肉样品，其 保藏编号为：GDMCC 60857，分类名为：Campylobacter jejuni；空肠弯曲菌菌 株3853-1A是分离于中国银川市北京华联南门广场店鸡肉样品，保藏编号为： GDMCC 60858，分类名为：Campylobacter jejuni；空肠弯曲菌菌株542-1A是分 离于中国拉萨药王山农贸市场鸽子肉样品，其保藏编号为：GDMCC60859，分 类名为：Campylobacter jejuni。上述分离获得的空肠弯曲菌菌株346-1C、3853-1A、 542-1A均保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：中国广州市先烈中路100 号省微生物所实验楼五楼，保藏日期：2019年10月27日。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供了用于检测空肠弯曲菌的特异性分子靶标，所述分子靶标为：