[发明专利]一种检测PGR基因表达的引物、探针、试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开了一种检测PGR基因表达的引物对组合，属于医学分子生物学技术领域。所述引物对组合包括用于扩增PGR基因的第一引物对，还可包括分别用于扩增内参基因ACTB和PGK1的第二引物对和第三引物对。本发明进一步公开了一种探针组合，包括靶向所述第一引物对的扩增产物的第一探针，还可包括靶向所述第二引物对的扩增产物的第二探针和靶向所述第三引物对的扩增产物的第三探针。本发明还公开了利用上述引物对组合或其与上述探针组合制备的试剂盒以及对PGR基因进行检测的方法。利用本发明检测PGR基因表达，样本类型不受限制，且检测结果更加准确，检测周期短，人为误差小，重复性好，较IHC更加灵敏可靠。

技术领域

本发明属于医学分子生物学技术领域，具体地，涉及一种检测PGR基因表达的引物、探针、试剂盒和检测方法。

背景技术

ERα、PR、HER-2和Ki-67状态是判断早期浸润性乳腺癌(非特殊类型)分子分型的重要指标，根据其不同的状态可以分为Luminal型(Luminal A和Luminal B)、HER-2过表达型或基底样型(Basal-like)。现有的研究表明，与原发灶相比，部分晚期乳腺癌转移灶的ERα、PR和HER2状态均可能发生变化，导致晚期乳腺癌治疗策略随之改变。统计显示，原发灶ER、PR、HER2为阳性而转移灶为阴性乳腺癌病例的发生比例分别为12％～24％、22％～41％、3％～16％，由原发灶阴性而转移灶阳性病例比例依次为5％～9％、7％～19％、1％～5％。由于乳腺癌肿瘤本身的异质性，即使早期乳腺癌同一瘤体内部肿瘤异质性的存在，有可能在肿瘤进展出现优势克隆，从而出现和原发肿瘤不同的基因表达谱。

ERα介导的信号通路可导致HER2表达下调，ERα表达水平越高乳腺癌复发风险越低。PR的表达很大程度上依赖于ERα，肿瘤组织中表达PR而不表达ERα的概率不到1％，乳腺癌复发时ERα及PR表达均降低，且乳腺癌HR+/HER2+亚型发生转移后更易转变为HR-/HER2+亚型(P＝0.006)。研究表明化疗和内分泌治疗与ERα状态改变可能相关，ERα状态在原发灶和转移灶检测前后不一致的患者较两者一致的患者预后更差，尤其是ERα阳性转阴性的患者。复发/转移性乳腺癌再活检明确ERα、PR、HER2状态，对进一步治疗至关重要。专家建议在临床可能的情况下对于所有晚期乳腺癌患者进行复发/转移灶ERα、PR和HER2状态再活检，根据再活检ERα、PR和HER2状态，结合临床及影像学特征综合考虑选择复发/转移性乳腺癌的治疗策略。指南建议应对所有的乳腺浸润性癌和非浸润性癌进行激素受体状态检测。

目前常用的基因状态检测方法是利用免疫组织化学(IHC)这种在病理科进行的半定量的方法，用抗体对肿瘤组织中蛋白进行检测。但根据美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理医生协会(CAP)的联合研究，由于受免疫组织化学技术本身所限，每五个乳腺癌患者就有一个可能由于IHC检测不准确而接受了错误的治疗方案。因此，临床上亟需一种准确性高的基因表达检测方法。

发明内容

为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种用于检测PGR基因表达的引物对组合，包括用于扩增PGR基因的第一引物对，所述第一引物对的上下游引物分别具有SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

PGR基因编码孕酮受体(progesterone receptor，PR)。PR也被称为NR3C3，nuclearreceptor subfamily 3,group C,member 3，即核受体第三亚族C组成员3)是一种细胞内蛋白质，由甾体激素孕酮激活。

进一步地，所述引物对组合还包括分别用于扩增内参基因ACTB和PGK1的第二引物对和第三引物对，其中，所述第二引物对的上下游引物分别具有SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示核苷酸序列；所述第三引物对的上下游引物分别具有SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示核苷酸序列。