[发明专利]一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法

说明书

本发明提供一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，所述制备方法包括：向电渗析槽中加入烟酰胺单核苷酸、三磷酸腺苷、烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶和水，开启电渗析设备，进行反应。所述制备方法通过电渗析法将反应的副产物焦磷酸从反应体系中移除，从而打破反应平衡，促使反应向正反应方向进行，能够提高产物NAD+的生成率，并降低反应后处理的难度。

技术领域

本发明属于制药技术领域，涉及一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法。

背景技术

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+)是一种传递质子的辅酶，参与物质代谢、能量合成和DNA修复等多种生理活动，对机体免疫能力亦有重要作用。有研究表明，有多种疾病与机体内NAD+浓度失衡有关。

目前，NAD+已被广泛用于治疗疾病，其合成方法主要有化学法、化学酶法和生物发酵法。化学法反应路线长，且需使用昂贵的试剂和大量有机溶剂，因此，化学酶法和生物发酵法常被用于工业化生产NAD+。

吕晓群等(吕小群，张偌瑜，徐学文，等。烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶的表达、纯化及活性测定[J]。第二军医大学学报，2010(11):1251-1254。)提出了一种利用烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶(NMNAT)催化烟酰胺单核苷酸合成NAD+的方法，即能够催化烟酰胺单核苷酸(NMN)和三磷酸腺苷(ATP)一步合成NAD+，但反应转化率较低，造成原料浪费且增加后处理难度。

Rodríguez(Luis Ernesto Contreras Rodríguez,Mathias Ziegler,MaríaHelena Ramírez Hernández.Kinetic and oligomeric study of Leishmaniabraziliensis nicotinate/nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase[J].Heliyon,2020,e03733.)等报道NMNAT催化NMN和ATP合成NAD+的反应为可逆反应，反应生成NMN同时，还会生成副产物焦磷酸，当反应体系中焦磷酸达到一定的浓度，反应会达到平衡，从而不利于NMN彻底转化为NAD+。

Lu(Dongmei Lu,Guiqiu Xie,Renjun Gao Cloning,purification,andcharacterization of inorganic pyrophosphatase from the hyperthermophilicarchaea Pyrococcus horikoshii[J].Protein Expression and Purification,2014,99:94-98.)等采用焦磷酸酶分解焦磷酸，从而去除NMNAT催化NMN和ATP合成NAD+的反应中的焦磷酸，促进反应向合成NAD+的方向进行，但额外添加焦磷酸酶提高了成本，同时也会产生其它副产物，降低了NAD+的收率，并增加了后处理难度。

综上所述，提供一种工艺简单、成本低且能够达到较高转化率的制备方法，对于NAD+制备领域具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，所述制备方法操作简单，能够提高反应的转化率，降低反应后处理的难度。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，所述制备方法包括：

向电渗析槽中加入烟酰胺单核苷酸、三磷酸腺苷、烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶和水，开启电渗析设备，进行反应，得到所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。