[发明专利]AML预后相关基因表达检测试剂盒

说明书

本发明提供一种AML预后相关基因表达检测试剂盒。所述试剂盒包括用于AML预后相关基因表达检测的分子探针，以及用于检测内参基因ABL1表达的分子探针。本发明针对与AML预后相关性最高的10个基因，设计了用于检测各基因转录本mRNA的探针，在同一孔中对这些标志基因的表达进行NanoString数字化表达检测，绘制数字基因表达谱，可用于AML预后判断和治疗效果的辅助评估。本发明提供的检测试剂盒具有通量高，耗时短，所用标本量少，可重复性好，准确性和敏感性高等优点，且检测结果与RT‑PCR定量技术相当。

技术领域

本发明涉及核酸检测领域，具体地说，涉及一种AML预后相关基因表达检测试剂盒。

背景技术

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是造血系统的髓系原始细胞克隆性恶性增殖性疾病。现有用于AML预后判断和治疗效果评估的方法主要是实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR，RQ-PCR)，该方法敏感性高，准确性好，是目前最常用的检测方法；但其通量不足，在需要同时对多个基因定量的情况下，实验设计及操作步骤繁琐。

NanoString数字化基因检测技术是新一代的多重核酸定量技术，在基因表达谱的验证、研究和临床应用中扮演了越来越重要的角色。NanoString技术在一个体系中可进行逾八百个的颜色条码探针和特异性序列的杂交反应，最后直接以数字化输出的形式读取定量结果。该技术自动化程度高，反应中无需酶逆转录及扩增的过程，避免了相关偏差，其检测敏感性、准确性与实时荧光定量PCR技术相当。目前，NanoString数字基因检测技术在高通量研究结果验证、基因调控机理、疾病临床分子分型等方面发挥了重要作用。其研究涉及动植物发育、炎症、免疫、干细胞、肿瘤、药物耐药、信号转导等多个领域。

发明内容

本发明的目的是提供一种AML预后相关基因表达检测试剂盒。

本发明的另一目的是提供基于NanoString技术检测AML预后相关基因表达水平的方法。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种用于AML预后相关基因表达检测的分子探针，所述AML预后相关基因选自AF1q(GenBank：NM_006818.3)、BAALC(GenBank：NM_024812.2)、BRE(GenBank：NM_004899.3)、ERG(GenBank：NM_182918.3)、FLT3(GenBank：NM_004119.1)、MLL5(GenBank：NM_182931.2)、MN1(GenBank：NM_002430.2)、PRAME(GenBank：NM_006115.3)、EVI1(GenBank：NM_005241.2)和WT1(GenBank：NM_000378.3)中的至少一个。

所述分子探针由报告探针和捕获探针按5’-3’方向串联而成；所述报告探针为荧光分子条形码(DNA单链条形码)；

所述捕获探针为3’端带有生物素的DNA分子，且可与目标基因转录得到的mRNA特异性结合。每条捕获探针分别对应于不同的荧光分子条形码。

优选地，所述AML预后相关基因为AF1q、BAALC、BRE、ERG、FLT3、MLL5、MN1、PRAME、EVI1和WT1，它们对应的分子探针为P1～P10，P1～P10的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1-10所示。

第二方面，本发明提供含有所述分子探针的检测试剂或试剂盒。

第三方面，本发明提供AML预后相关基因表达检测试剂盒，所述试剂盒包含所述分子探针以及用于检测内参基因ABL1表达的分子探针P11；P11的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示。

第四方面，本发明提供一种用于AML预后相关基因表达检测的杂交反应体系，所述反应体系如下：