[发明专利]含有特异性分子靶标的小肠结肠炎耶尔森氏菌标准菌株及其检测和应用

说明书

本发明提供了三株可以作为小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)相关实验的对照的标准菌株，所述标准菌株具有典型的小肠结肠炎耶尔森氏菌菌落形态和生理生化特征，可用于检验小肠结肠炎耶尔森氏菌选择性培养基的准确性，同时可以作为小肠结肠炎耶尔森氏菌常见生理生化表型及分子特征的检测中的对照样品；所述标准菌株含有相应的特异性分子靶标(如SEQ ID NO:1～11所示的核苷酸序列)，还提供了含有所述分子靶标特异性的特异性PCR扩增引物。本发明还提供了一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的冻干保护剂，所述保护剂其冻干存活率能达到85％以上；在‑20℃条件下保存可以保证其数量级至少一年以上不发生变化，因此可用于长期储存质控菌株。

技术领域

本发明属于微生物检验技术领域，具体涉及小肠结肠炎耶尔森氏菌的标准 菌株；菌株生理生化和分子特征；相应分子靶标和PCR扩增引物以及一种小肠 结肠炎耶尔森氏菌的保藏方法。

背景技术

小肠结肠炎耶尔森氏菌(Y.enterocolitica)作为一种革兰氏阴性的人畜共患 病的致病菌广泛分布于自然界，是引起耶尔森氏病的主要原因。因其能够在低 温环境(0-4℃)下生长，近年来冷冻冷藏食品成为该病的新的重要传染源。耶 尔森氏病的主要症状为肠胃炎、假性阑尾炎和腹泻等，少部分患者会因感染出 现慢性疾病如反应性关节炎等。欧盟食品安全局2013-2017年的监测数据显示， 在欧盟范围内的人畜共患疾病中，耶尔森氏病的患病人数一直居于第三位，并 且随着欧盟成员国监测报告系统的完善，患病人数呈上升趋势。现已发现的小 肠结肠炎耶尔森氏菌按照生物型可以分为六类：1A、1B和2-5。其中1A生物 型菌株因其不含有重要的毒力质粒pYV在过去一直被认为是非致病菌株，但随 着调查研究的深入，越来越多的耶尔森氏病病例中分离出了1A生物型的小肠结 肠炎耶尔森氏菌，因此1A生物型的小肠结肠炎耶尔森氏菌被认为对哺乳动物存 在潜在的致病能力。目前我国对于耶尔森氏病的监控还存在不足，同时食品中 小肠结肠炎耶尔森氏菌的污染暂时还缺乏详细资料。因此设立小肠结肠炎耶尔 森氏菌的标准菌株对于完善我国对耶尔森氏病的监测和防控有重要意义。

目前小肠结肠炎耶尔森氏菌的标准菌株主要来源于美国微生物菌株保藏中 心(American Type Culture Collection，ATCC)、我国医学微生物菌种中心(CMCC， Nationalcenter for medical culture collections)等。这些标准菌株多来源于国外临 床分离，并不能很好的反映该菌在食品中的污染和传播状况。同时，由于不同 国家和地区食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的主要流行菌株类型不同，国外主要 流行株的性状不能作为中国主要流行株性状的代表。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供3株来自中国地区的小肠结肠炎耶尔森 氏菌的食品分离菌株，该菌株具有典型的小肠结肠炎耶尔森氏菌生理生化特性， 且能较好的反映中国地区该种菌的遗传背景。小肠结肠炎耶尔森氏菌菌株C009 是分离自中国广州市番禹区的冻鸭翅样品，其生物型为1A，血清型为O：5， 其保藏编号为：GDMCC 60852，分类名为：Yersinia enterocolitica；小肠结肠炎 耶尔森氏菌菌株Y802分离自中国上海市的肉糜样品，其生物型为1A，血清型 为O：8，保藏编号为：GDMCC 60853，分类名为：Yersiniaenterocolitica；小肠 结肠炎耶尔森氏菌菌株C1702分离自广东省汕头市的牛肉样品，其生物型为1A， 血清型未知，其保藏编号为：GDMCC 60855，分类名为：Yersiniaenterocolitica。 上述分离获得的小肠结肠炎耶尔森氏菌菌株C009、Y802、C1702均保藏于广东 省微生物菌种保藏中心，地址：中国广州市先烈中路100号省微生物所实验楼 五楼，保藏日期：保藏日期为2019年10月27日。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供了三株小肠结肠炎耶尔森氏菌的标准菌株(Y.enterocolitica)， 其特征在于，是(a)、(b)或(c)：