[发明专利]一种抗多房棘球绦虫原头蚴抗原单克隆抗体的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种抗多房棘球绦虫原头蚴抗原单克隆抗体的制备方法及其应用，属于生物技术及细胞工程领域。本发明通过杂交瘤技术采用Balb/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合建立杂交瘤细胞株。由上述细胞通过体外培养法、动物体内诱生腹水法制备单克隆抗体；制备了泡球蚴免疫荧光试剂盒。本发明为临床和科研机构提供了抗多房棘球绦虫原头蚴抗原的特异性单克隆抗体，它既可用于ELISA试验对临床样品进行检测，也可用于免疫组化试验对病理标本进行临床诊断，还可为包虫病研究部门提供便利的研究工具，在多房棘球蚴病的诊断、检测中有广泛的应用价值。

技术领域

本发明属于生物及细胞工程技术领域，涉及一种抗多房棘球绦虫原头蚴抗原单克隆抗体的制备方法及其应用。

背景技术

多房棘球蚴病又称泡型包虫病(AE)，是一种由多房棘球绦虫的幼虫(多房棘球蚴或泡球蚴)寄生于动物或人体内而致的重要人畜共患寄生虫病。多房棘球蚴早期寄生于中间宿主的肝内，导致局部肝组织病变、增生、纤维化、萎缩、变性和坏死，而临床症状不明显；晚期似肝癌样转移，可转移至肺、脑、乳腺等脏器而被称为“虫癌”，若不及时治疗，10年病死率高达94％，因此泡型包虫病已成为人类致死率最高的慢性感染性疾病之一。泡型包虫病主要分布在北半球，成局部地方性流行趋势，在我国主要分布于新疆、青海、西藏、四川、甘肃和宁夏等西部省区及内蒙古。我国西部牧区野生狐狸、放牧犬和啮齿类动物分布广泛，使得多房棘球绦虫生活史循环链存在复杂性，进一步增加了宿主动物和人传播和感染该病的风险，尤其在一些偏远牧区人群发病率高达10％。

目前主要使用B超、CT、X射线和磁共振(MRI)等影像学方法以及酶联免疫吸附实验(ELISA)和蛋白质印迹(Western blotting)等免疫学实验对该病进行检测。影像学检查时，AE的一些非典型和体积较小的病灶常与肝癌和肝脓肿等相混淆，而血清学检测则因使用的抗原为粗抗原导致敏感性和特异性较差，常与及其他寄生虫抗原存在交叉反应。

在针对多房棘球蚴病进行的科研工作中，也常常需要能和多房棘球绦虫原头蚴抗原特异性结合的抗体作为研究工具，来确定泡球蚴的定性定位情况。抗多房棘球绦虫原头蚴抗原单克隆抗体也是进行检测试剂盒研发工作中必不可少的工具。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗多房棘球绦虫原头蚴抗原单克隆抗体的制备方法及其应用。

1、本发明的目的是提供能分泌抗多房棘球绦虫原头蚴抗原特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

2、本发明的另一目的是提供由上述细胞株分泌的抗多房棘球绦虫原头蚴抗原的特异性单克隆抗体。

3、本发明的另一目的是上述单克隆抗体在多房棘球蚴病诊断和检测上的可能应用。

其技术方案如下：

一种抗多房棘球绦虫原头蚴抗原单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、建立细胞株

(1)抗原制备

材料：泡球蚴感染的昆明鼠，培养皿、手术器械、研钵灭菌备用、医用纱布、50mL离心管、5mL离心管、1.5mL离心管、0.9％氯化钠注射液，细胞超声波粉碎仪(宁波新芝JY92-II)。

步骤：采用泡球蚴感染的昆明鼠颈部脱臼致死。75％乙醇浸泡15min体表消毒。按解剖层次开腹。剪取腹腔内生长良好的泡球蚴组织放入培养皿中加入0.9％氯化钠注射液6mL。用眼科剪小心去除泡球蚴表面的宿主组织和血管，将泡球蚴放入灭菌处理的研钵中。