[发明专利]LAMP反应体系/分体系的分割处理和常温运输方法

说明书

本发明公开了一种LAMP反应体系/分体系的分割处理和常温运输方法，该方法以无菌无纺布/无菌无毛纸作为LAMP反应体系/分体系的无菌载体，首先将LAMP反应体系/分体系与海藻糖混合，得到混合液；再将无菌载体放入混合液中，充分浸润；再利用冷冻干燥机对上述的无菌载体进行冷冻干燥处理；最后将冷冻的无菌载体通过切割仪器进行等量切割，一管化分装，常温保存或运输。本发明将酶组分和PCR反应液组分分别固定在不同的无菌载体上，等量切割后按需求放入反应管内，重新组合成一管式LAMP反应体系，既避免了常规一管式混合冻干法假阳性率高的问题，又延长了LAMP反应体系的常温保存或运输期限。

技术领域

本发明涉及生化试剂技术领域，具体涉及一种LAMP反应体系/分体系的分割处理和常温运输方法。

背景技术

2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术，即环介导等温扩增技术，英文名称为“Loop-mediatedisothermal amplification”，简称“LAMP”技术。“LAMP”技术是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在链置换DNA聚合酶(Bst DNA Polymerase)的作用下，60～65℃恒温扩增，15～60分钟左右即可实现10⁹～10¹⁰倍的核酸扩增。

与常规PCR相比，“LAMP”技术具有以下优势：

1.灵敏度高，比传统的核酸扩增法高2～5个数量级；

2.反应时间短，不需要模板的热变性，30～60分钟就能完成反应；

3.反应全过程恒温，无温度循环，临床使用不依赖于昂贵的专业检测设备；

4.反应结果可通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，不需要电泳及紫外观察，简便快捷，不具备专业技能的一般人员就能在疾病现场进行快速诊断。

近年来，“LAMP”技术已被多国广泛运用于病原体微生物快速检测，如SARS、流感病毒、肺炎支原体、结核分枝杆菌等。但在实际应用中，LAMP反应所需的试剂：引物、d NTPs、聚合酶、反应缓冲液等均需要在-20℃以下低温长期保存及短期运输，且试剂反复冻融会影响其活性甚至失效。同时，预先将除待测样品核酸(DNA或RNA)以外的各种LAMP反应试剂组分(即引物、d NTPs、聚合酶、反应缓冲液等)配制成一管式预混物，长期放置有可能会使体系受引物二聚体的影响造成假阳性的发生。

所以，发明一种将引物与其他LAMP反应试剂组分冻干在不同的无菌载体上，避免了常规一管式混合冻干法假阳性率高的问题，且便于常温保存或运输的方法具有重要意义，目前，尚没有相关记载。

发明内容

目前，由于核酸扩增反应试剂各组分混合成一管式的体系长期放置有可能会使体系受引物二聚体的影响造成假阳性的发生，不利于长期保存及运输，因此，现有的商品试剂盒一般会将酶组分和PCR反应液组分分装在2个不同的容器内，商品试剂盒需要在-20℃以下低温长期保存及短期运输，且试剂反复冻融会影响其活性甚至失效，而现有的冻干技术制备成的体系冻干粉中，引物和酶组分混合成一管式的体系长期放置有可能会使体系受引物二聚体的影响造成假阳性的发生。本发明提供了一种LAMP反应体系/分体系的分割处理和常温运输方法，确切的说是除待测样品核酸(DNA或RNA)、水分以外的LAMP反应体系/分体系的分割处理和常温运输方法。

为实现上述目的，本发明所设计一种LAMP反应体系/分体系的分割处理和常温运输方法，包括以下步骤：

1)将LAMP反应体系/分体系与海藻糖混合，得到混合液；

2)将无菌载体放入混合液中，充分浸润；再利用冷冻干燥机对上述的无菌载体进行冷冻干燥处理(使LAMP反应体系/分体系被冻干在无菌载体上)，其中，所述无菌载体为无纺布/无毛纸；