[发明专利]一种基因组DNA室温保存卡及其制作方法与应用

权利要求书

1.一种基因组DNA室温保存卡，其特征在于，包括具有液体吸收性能的介质和细胞保存液体预混剂。

2.根据权利要求1所述的基因组DNA室温保存卡，其特征在于，所述的介质包括但不限于滤纸、硝酸纤维素膜、尼龙膜、玻璃纤维素膜和硅胶膜中的至少一种；

所述的具有液体吸收性能的介质为经过氨基化试剂处理的介质，即氨基化的具有液体吸收性能的介质；

所述的介质经过氨基化试剂处理的方法为：将介质与氨基化试剂按照10～50μL氨基化试剂/cm²介质的比例混合，于密封条件下共孵育30min，然后取出氨基化的介质于0～80℃至完全干燥，即得具有液体吸收性能的介质；

所述的具有液体吸收性能的介质还可以经过核酸酶抑制剂、抗氧化抑制剂和/或其他能够使病原菌和病毒蛋白变性的试剂处理；

所述的细胞保存液体预混剂，包括如下按重量份计的各组分：0～200份抗凝血剂，0～200份细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。

3.根据权利要求1所述的基因组DNA室温保存卡，其特征在于，

所述的抗凝血剂为0～150份；

所述的抗凝血剂为枸橼酸钠、柠檬酸钠、肝素钠、肝素锂、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种；

所述的细胞稳定剂为1～200份；

所述的细胞稳定剂为甘油、羟乙基淀粉、羧甲基纤维素钠、二甲亚砜、蔗糖、聚乙烯醇、海藻糖和甜菜碱中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的基因组DNA室温保存卡，其特征在于，

所述的反应型细胞包封剂为1～100份；

所述的反应型细胞包封剂为可形成纳米层的化合物；

所述的纳米层为贵金属纳米层、硅纳米层、钛纳米层、有机纳米层和有机-无机杂化纳米层中的至少一种；

所述的反应型细胞包封剂为可形成贵金属纳米层的四氯合金酸、四氯合金酸钾、六氯合铂酸、六氯合铂酸钾、三氯氨铂酸钾、四氯铂酸钾、六溴铂酸钾；可形成硅纳米层的甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯、正硅酸四甲酯、双(三甲基硅烷基)乙酰胺、3-氨丙基三乙氧基硅烷、3-巯丙基三甲氧基硅烷、三甲基氯硅烷、氯三乙氧基硅烷、辛基三甲氧基硅烷、环己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、苄基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷；可形成钛纳米层的四异丙基钛酸酯、钛酸甲酯、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯；可形成其他无机纳米层的异丙醇铝、锆酸四丁酯和能够形成有机纳米层的多巴胺、鞣酸中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的基因组DNA室温保存卡，其特征在于，

所述的pH调节剂为0.1～100份；

所述的pH调节剂为盐酸、醋酸、磷酸、硫酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水和三羟甲基氨基甲烷中的至少一种；

所述的离子浓度调节剂为0.1～180份；

所述的离子浓度调节剂为氯化钠、氯化钾、氯化铵、磷酸钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸一氢钾、磷酸二氢钾和醋酸钠中的至少一种。

6.权利要求1-5任一所述的基因组DNA室温保存卡的制作方法，包括如下步骤：

(1)将抗凝血剂、细胞稳定剂、反应型细胞包封剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合均匀，即得细胞保存液体预混剂；

(2)将该细胞保存液体预混剂与待保存细胞样本混合并孵育，得到表面包有包封剂的液体基因组原位包封样本，然后将所得液体基因组原位包封样本滴加于具有液体吸收性能的介质上，待其干燥后可在室温长期保存，即得基因组DNA室温保存卡。

7.根据权利要求6所述的制作方法，其特征在于，

步骤(2)中所述的细胞保存液体预混剂与待保存细胞样品按10⁴～10⁹个细胞/mL细胞保存液体预混剂计算；

步骤(2)中所述的共孵育为温度-197～37℃，时间为1min～168h。