[发明专利]一种生物型人工肝治疗所需的C3A细胞的质量控制方法及其应用

权利要求书

1.一种生物型人工肝治疗所需的C3A细胞的质量控制方法，其特征在于，所述质量控制方法包括检测细胞性质稳定性，检测细胞安全性；

所述质量控制方法包括以下步骤：

1）建立主细胞库，检测细胞性质稳定性，检测细胞安全性；

2）建立制造商工作细胞库，检测细胞性质稳定性，检测细胞安全性；

3）建立工作细胞库，检测细胞性质稳定性，检测细胞安全性；

4）建立生产终末细胞库，检测细胞性质稳定性，检测细胞安全性；

建立主细胞库的方法包括如下步骤：在细胞培养设施中对C3A细胞进行亚培养并扩增，以3×10⁶至1×10⁷细胞/瓶的细胞密度在冷冻保存液中冻存；所述冷冻保存液包括10%DMSO、20%胎牛血清、MM培养液；

建立制造商工作细胞库的方法包括如下步骤：将主细胞库中的细胞复苏、培养、扩增，将细胞传代 4次，将第5代细胞以1.08×10⁷个细胞/瓶的细胞密度在冷冻保存液中冻存；所述冷冻保存液包括10%甘油、5%胎牛血清、MM培养液；

建立工作细胞库的方法包括如下步骤：将制造商工作细胞库中的细胞复苏、培养、扩增，以10⁷个细胞/瓶的细胞密度在冷冻保存液中冻存；所述冷冻保存液包括20%胎牛血清，10% DMSO、MM培养液；

建立生产终末细胞库的方法包括将工作细胞库中的细胞在培养瓶中复苏、培养、传代7次；

检测细胞性质稳定性包括检测细胞基因型、表型、活性；

检测细胞基因型使用短串联重复序列测试；所述短串联重复序列包括AMEL、D3S1358、D1S1656、D6S1043、D13S317、Penta E、D16S539、D18S51、D2S1338、CSF1PO、Penta D、TH01、vWA、D21S11、D7S820、D5S818、TPOX、D8S1179、D12S391、D19S433、FGA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测细胞安全性包括检测细胞是否存在细菌、真菌、支原体污染，检测细胞是否存在病毒污染，检测细胞是否存在细胞交叉污染，检测培养细胞的装置是否存在污染；所述病毒包括HSV-1/2、B19、EBV、SV40、HHV5/CMV、HHV6、HHV7、HHV8、HIV-1、HIV-2、HBV、HCV、HTLV、HAV、HEV、鼠痘病毒、大鼠泰勒氏脑脊髓炎病毒、乳酸脱氢酶病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、汉滩病毒、小鼠微小病毒、小鼠细小病毒、小鼠腺病毒、小鼠肝炎病毒、小鼠肺炎病毒、多瘤病毒、仙台病毒、幼鼠流行性腹泻病毒、小鼠唾液腺病毒、呼肠孤病毒3型、K病毒、小鼠胸腺病毒、小鼠逆转录病毒、猪细小病毒。

3.权利要求1或2所述的方法在制备生物型人工肝治疗所需的C3A细胞中的应用。