[发明专利]一种基于酶联免疫技术的过敏原检测方法、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种基于酶联免疫技术的过敏原检测方法、试剂盒及其应用，其中所述过敏原检测方法包括以下步骤：制备生物化抗体：根据抗原制备对应的抗体，并对抗体进行生物化处理，得到生物化抗体；制备酶标板：在酶标板上进行二抗IgG的包被，再利用抗体对酶标板进行包被，使抗体结合到二抗IgG上，再对酶标板进行封闭和烘干处理；先向上一步处理后的酶标板中的每孔分别加入样品待测液，再加入前述制备的生物化抗体；对酶标板进行充分洗涤后，再加入链接HRP的链霉亲和素进行结合；进行充分洗板后，加入显色液进行显色，加入终止液，终止酶反应后，进行吸光度检测。所述过敏原检测方法不仅提高该检测结果的灵敏度，且操作简单，能够节省原料降低成本。

技术领域

本发明涉及过敏原检测方法技术领域，尤其涉及一种基于酶联免疫技术的过敏原检测方法、试剂盒及其应用。

背景技术

食物过敏大多是食物中过敏原蛋白对机体细胞的选择性刺激，从而引起机体免疫系统异常和生理机能障碍，近年来已经成为国际关注的重大食品安全问题。

葵花籽是一类重要的食品过敏源，对于葵花籽过敏的人来说，食物中隐藏的葵花籽蛋白是一个严重的问题，即使极少量的过敏原也能引起过敏反应，可能导致严重的过敏性休克。因此，能够灵敏的检测食品中残留的检测系统非常必要。

目前用于过敏原检测的手段主要有PCR法、质谱检测和酶联免疫ELISA法。其中，PCR法是基于DNA水平的检测手段，而非直接对致敏蛋白进行定量，观察结果时需要借助多种仪器，容易造成污染和出现假阳性结果；而质谱分析样品前处理过于复杂，所需仪器价格昂贵，检测成本高、周期长，不适于快速高通量分析检测。而酶联免疫ELISA法，是基于蛋白质的检测技术，是现在最为成熟的方法之一，该方法是采用酶标抗体的方式，传统的酶联免疫标记技术是根据抗原或抗体结合到固相载体表面后，能保持其免疫活性，而抗原或抗体与酶结合后也能保持免疫学和酶的活性。酶结合物与相应抗原或抗体形成复合物，在底物的催化下发生显色反应，可根据加入酶底物溶液的显色深浅反应，判定有无相应的免疫反应及抗原或抗体的量。但是传统的酶联免疫ELISA法具有灵敏度相对较低，稳定周期短，成本高的缺点。

因此，现有技术有待进一步改进。

发明内容

针对现有过敏原检测方法的灵敏度较低、稳定周期短，成本高的问题，本发明提供了改进后的基于酶联免疫技术的过敏原检测方法。

为解决上述问题，本发明提供的技术方案如下：

本发明提供一种基于酶联免疫技术的过敏原检测方法，其包括以下步骤：

(1)制备生物化抗体：根据抗原制备对应的抗体，并对抗体进行生物化处理，得到生物化抗体；

(2)制备酶标板：在酶标板上进行二抗IgG的包被，再利用抗体对酶标板进行包被，使抗体结合到二抗IgG上，再对酶标板进行封闭和烘干处理；

(3)先向上一步处理后的酶标板中的每孔分别加入样品待测液，再加入前述制备的生物化抗体；

(4)对酶标板进行充分洗涤后，再加入链接HRP的链霉亲和素进行结合；

(5)进行充分洗板后，加入显色液进行显色，加入终止液，终止酶反应后，进行吸光度检测。

优选地，步骤(1)中，酶标板的二抗包被浓度为1～4ug/mL。

优选地，步骤(2)中，葵花籽抗体包被浓度为0.5～2ug/mL。

优选地，样品处理方法为：将称取的样品置于研钵或均质器中充分破碎后，将0.5-2g充分均质的样品，向其中加入10-40mL PH值8.0的0.01M的PB溶液(磷酸缓冲液)，并向PB溶液中加氯化钠溶液至其浓度为1.5moL/L，50℃震荡混匀10～15min。于4000r离心10min，取上清作为样品待测液。