[发明专利]一种家用型检测芝麻过敏原的高灵敏试剂盒、其检测方法和应用

权利要求书

1.一种家用型检测芝麻过敏原的高灵敏试剂盒，其特征在于，包括：

试纸条：NC膜上的检测线上包被羊抗小鼠IgG，浓度为0.1～0.5mg/ml，质控线上包被羊抗兔IgG，浓度为2～8mg/ml；试纸条由上至下为吸水纸、NC膜，样品垫，固定于PVC胶板上；其中，吸水纸和样品垫与NC膜重叠部分为2mm。

金标微孔：将兔抗芝麻多克隆抗体与胶体金的复合物溶液与冻干稀释液的混合液加入到低吸附酶标板的微孔后进行冻干得到；

以及鼠抗芝麻单克隆抗体和抗体保护稀释液。

2.根据权利要求1所述的高灵敏试剂盒，其特征在于，还包括：还包括用于提取样品中的芝麻抗原的萃取液，萃取液主要由以下浓度的各组分组成：摩尔浓度为0.05～0.1M的Tris-HCl、质量体积浓度为0.5～1.5％的Triton X-100、质量体积浓度为0.5～3％的NaCl、质量体积浓度5～30％的乙醇、质量体积浓度为0.01％～0.1％的NaN₃，溶剂为水，pH为9.0。

3.一种芝麻过敏原的家用型检测方法，其特征在于：采用如权利要求1所述的试剂盒进行检测，方法包括以下步骤：

(1)提取待测样品中的抗原，得到提取液；

(2)向金标微孔中加入3～4滴提取液、芝麻鼠源单克隆抗体，吹打多次以完全溶解微孔内的粉色粉末，室温孵育后，将试纸条MAX端向下插入微孔内，5min后根据试剂条的显色结果判断样品中是否含有芝麻过敏原；

判断依据为：当只有质控线显色时，判定检测结果为阴性；当检测线和质控线同时显色时，判定检测结果为阳性；当质控线不显色，不管检测结果显色与否，都判定检测结果为无效。

4.如权利要求1所述的家用型检测芝麻过敏原的高灵敏试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)金标抗体的制备：向制备好的胶体金中加入碳酸钾，混合均匀后，边搅拌边加入芝麻兔多抗，室温反应2h后，再逐滴加入10％牛血清白蛋白，室温反应1h后，离心收集沉淀并用10ml复溶液重悬，得到芝麻金标抗体溶液；

所述复溶液含有以下浓度的各成分：摩尔浓度为0.01M的pH7.4的PB、质量体积浓度为1～5％的牛血清白蛋白、质量体积浓度为1～5％的蔗糖。

(2)金标微孔的制备：将芝麻金标抗体溶液与冻干稀释液以1:(10～15)的体积比进行混合，将混合液分装到低吸附酶标板中，在冰箱中冷冻过夜，再进行真空冷冻干燥至少20h后，扣合酶标板帽，得到金标微孔；

(3)单克隆抗体溶液的制备：将单克隆抗体用抗体保护液稀释8万～20万倍，备用；

(4)试纸条的准备：NC膜上检测线包被羊抗鼠，浓度为0.1～0.5mg/ml，质控线包被羊抗鼠，浓度为2～8mg/ml，37度烘干16h；由上至下将吸水纸、NC膜，样品垫和MAX线固定在PVC胶板上，制备得到试纸条；

(5)样品测试：提取待测样品中的抗原，得到提取液；向金标微孔中加入3～4滴提取液、芝麻鼠源单克隆抗体，吹打多次以完全溶解微孔内的粉色粉末，室温孵育后，将试纸条MAX端向下插入微孔内，5min后根据试剂条的显色结果判断样品中是否含有芝麻过敏原。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，提取待测样品中的芝麻抗原的方法为：

将2～4ml萃取液和一个磁珠加入到5ml小瓶中；向小瓶中直接加入液体样本或固体样本后，上下震摇小瓶30s，静止至少1min后，吸取上清得到提取液；

其中，萃取液主要由以下浓度的各组分组成：摩尔浓度为0.05～0.1M的Tris-HCl、质量体积浓度为0.5～1.5％的Triton X-100、质量体积浓度为0.5～3％的NaCl、体积浓度5～30％的乙醇、质量体积浓度为0.01％～0.1％的NaN₃，溶剂为水，pH为9.0。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述抗体保护液含有以下浓度的各成分：0.01M的pH7.4的PB、体积浓度为5％的新生牛血清和质量体积浓度为0.85％的氯化钠。