[发明专利]外泌体miRNA作为诊断2型糖尿病合并冠心病的分子标志物及其应用

说明书

本发明属于分子诊断技术领域，具体涉及外泌体miRNA作为诊断2型糖尿病合并冠心病的分子标志物及其应用。所述外泌体miRNA为miR‑15a‑3p、miR‑18a‑5p、miR‑19a‑3p、miR‑133a‑3p、miR‑155‑5p和miR‑210‑3p中任一种或两种以上的分子标志物组合，所述外泌体miRNA的具体核酸序列如SEQ NO.4、8、11、3、2、1所示。基于一个总的发明构思，本发明还包括外泌体miRNA在制备用于诊断2型糖尿病合并冠心病的试剂盒、微阵列或生物芯片中的应用。本发明证明上述六种血浆外泌体miRNA可以作为2型糖尿病合并冠心病的分子诊断标志物，将其制成诊断2型糖尿病合并冠心病的试剂盒、微阵列或生物芯片，通过检测受试者血浆外泌体miRNA的表达量，可以对2型糖尿病合并冠心病进行快速诊断和判定。

技术领域

本发明属于分子诊断技术领域，具体涉及外泌体miRNA作为诊断2型糖尿病合并冠心病的分子标志物及其应用。

背景技术

冠心病(coronary heart disease，CHD)在心血管系统疾病中占有重要地位，它是由冠状动脉粥样硬化引起的管腔狭窄或闭塞，导致心肌缺血缺氧或坏死而引起的心脏疾病。近年来该病在国内的发病率不断上升，日益成为威胁我国人民健康的重要因素。糖尿病与冠心病的发展密切相关，在糖尿病人群中冠心病的发病率较高，与单纯冠心病患者相比，其冠状动脉病变呈现弥漫性，多支病变的特点，且管腔的狭窄程度较普通冠心病狭窄程度更加严重，此外糖尿病合并冠心病与普通冠心病的临床症状存在差异，其表现为疼痛症状与部位不典型，胸痛较普通冠心病患者不明显，或仅表现胸闷等症状，冠心病并发心律失常患者可无心悸等症状，根据文献显示可能与糖尿病损伤神经系统或末梢血管有关，不利于糖尿病合并冠心病的及早诊断。有研究显示糖尿病患者往往伴随体内大血管的损伤，提示糖尿病不仅是一种血管性疾病，也是一种炎症性疾病。随着糖尿病的患病率的增加，其发病特点呈现年轻化、复杂化的趋势，对家庭和社会的危害也日益显现。虽然目前已经对冠心病的研究取得较大进展，但是两者的研究仍不足，其发病机制与关系仍不确切。临床迫切需要寻找冠心病、冠心病合并糖尿病的分子诊断标记，进行早预防、早治疗，尤其是对冠心病合并糖尿病患者，早期诊断将有效提高患者生存率。

目前临床上冠心病诊断的金标准是冠状动脉造影，但因其有费用高、有创性、有检查风险的特点存在缺陷，因此研发一种无创、快速灵敏且低成本的分子诊断方法势在必行。外泌体是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200nm，具有双层膜结构，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括肿瘤细胞在内几乎所有类型的细胞(免疫细胞、神经细胞、干细胞)，都可以产生并释放外泌体。外泌体可以携带脂质体、蛋白质、mRNA和miRNA到达靶组织，并且可以参与细胞交流，免疫反应以及肿瘤的生长和迁移。最新研究显示，在疾病状态下外泌体miRNA会发生含量、种类等的变化，与血液中游离的miRNA相比，检测外泌体miRNA作为生物标记具有许多优势。外泌体可以有效地保护内含物免受核酸酶降解，从而保持循环中外泌体miRNA的完整性和功能性，这些特征使得外泌体成为一个有价值的诊断工具。

发明内容

本发明的目的是提供一种外泌体miRNA作为诊断2型糖尿病合并冠心病的分子标志物及其应用，为2型糖尿病合并冠心病诊断提供一种有效的诊断工具。

为了实现上述技术目的，本发明采用以下技术方案：

外泌体miRNA作为诊断2型糖尿病合并冠心病的分子标志物，所述外泌体miRNA为miR-15a-3p、miR-18a-5p、miR-19a-3p、miR-133a-3p、miR-155-5p和miR-210-3p中任一种或两种以上的分子标志物组合，所述外泌体miRNA的具体核酸序列如SEQ NO.4、8、11、3、2、1所示。

优选的，所述外泌体miRNA为miR-155-5p、miR-133a-3p和miR-15a-3p。

进一步优选的，所述外泌体为血浆外泌体。