[发明专利]一种鉴别7种动物源性成分的碟式微流控芯片

说明书

本发明提供一种鉴别7种动物源性成分的碟式微流控芯片，分别针对已实现规模化养殖的猪、马、牛、羊、北极狐、鸡、鸭的16S基因建立特异性LAMP方法，借助微流控技术同时检测7个物种，可在60min时间内实现对以上7个物种的检测，特异性良好，待检测的物种之间不发生交叉反应。

技术领域

本发明涉及肉及肉制品安全检测领域，具体涉及一种鉴别7种动物源性成分的碟式微流控芯片，所述的7种动物为规模化养殖的猪、马、牛、羊、北极狐、鸡和鸭，本发明根据7个物种的16S基因建立特异性LAMP检测，并借助微流控技术建立可以同时检测7个物种的荧光LAMP碟式芯片快速检测方法。

背景技术

动物源成分真伪检测鉴别是食品与饲料质量安全重要内容，对维护人民健康安全、维护经济秩序和社会稳定、进出口食品与饲料监管均具有重要意义。近年来，国内外肉类产品掺杂使假违规犯罪行为屡被曝光，如国内某些不法商人采用低价值物种肉类如鸭肉、猪肉甚至狐狸肉、水貂肉等掺入甚至冒充高价值的牛、羊肉制品，并过量添加色素、香精等杂质。2013年1月，“马肉风波”事件影响欧洲16国，迫使欧盟重新审查其食品追溯体系和标签制度，并紧急出台措施要求成员国对市场流通的牛肉制品加强DNA抽检。动物源成分检测鉴别也是饲料安全重要内容，涉及传染性海绵状脑病(TSE)、非洲猪瘟、高致病性禽流感等重大疫病防控。自1987年欧洲发生疯牛病以来，为防控疯牛病，世界各国家均先后制定法律、法规，严格控制饲料中动物源性成分的使用；我国对来自“非疯牛病风险可忽略”国家和地区的饲用动物产品规定禁止含反刍动物源(牛、羊、鹿等)成分。为防控高致病性禽流感、非洲猪瘟、口蹄疫等其他重大动物疫病，各国也制定了针对饲料中特定动物源成分的禁令。

在现行国家标准中如猪、牛羊等多个物种的鉴定方法都是以mtDNA为靶标的DNA分析技术。尽管国家标准和一些发明方法中可以实施对鹿肉和猪肉等鉴定，但是目前的物种鉴定方法中对牦牛肉、鹿肉和驼肉等产制品仍没有一种高效的鉴定方法。因此，建立一种简便易行且可以同时鉴定多种动物源性成分的的检测方法对于提高检测工作效率以及对未知动物源性成分的溯源鉴定都具有重要意义。

微流控技术又可称为微型全分析系统（Miniaturized totalanalysis systems，uTAS）及芯片实验室，是一种基于微机械加工、生物技术和纳米化学分析等技术发展而来的便携式高通量快速检测技术。微流控芯片是实现微流控技术的平台，其内部结构包括微米级的管道、腔室、气/液泵或阀门等流体器件，可对由微量生物大分子物质及化学试剂等成分组成的微流体进行控制。与其他检测技术相比，微流控芯片检测技术具有以下优势：一是缩减试剂成本；二是能够检测微量样品；三是检测通量高；四是微流体反应速率高，检测过程耗时短；五是自动化程度高，确保了检测结果的准确性、重复性和稳定性；六是便携性强，适用于现场检测。因此，微流控芯片技术在食品安全、医疗卫生及环境检测方面具有良好的应用前景。

因此，将微流控技术应用于猪、马、牛、羊、北极狐、鸡和鸭的7个物种的一次性快速检测对于提高检验检疫部门监管工作效率和食品掺假样本调查鉴定方面都有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴别7种动物源性成分的碟式微流控芯片，分别针对已实现规模化养殖的猪、马、牛、羊、北极狐、鸡、鸭的16S基因建立特异性LAMP方法，借助微流控技术同时检测7个物种，可在60min时间内实现对以上7个物种的检测，特异性良好，待检测的物种之间不发生交叉反应。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种鉴别7种动物源性成分的碟式微流控芯片，所述的碟式微流控芯片包括分别用于检测猪、马、牛、羊、北极狐、鸡和鸭的基因的反应池，在所述的反应池中进行LAMP扩增反应；

所述的检测猪基因的反应池中的用于核苷酸扩增的引物组具体为：