[发明专利]一种核酸适配体-四链体的尿液氨基酸检测试剂盒及方法

说明书

本发明属于医学检测领域，具体涉及一种核酸适配体‑四链体的尿液氨基酸检测试剂盒及方法。本发明公开了一种核酸适配体‑四链体的尿液氨基酸检测试剂盒，包括某一氨基酸特异性核酸适配体、DNA G四链体序列，其特征在于所述某一氨基酸特异性核酸适配体与DNA G四链体序列部分序列互补，在无目标氨基酸存在情况下，二者形成互补结合序列，DNA G四链体序列无法形成G四链体。本发明方法操作简便，分析速度快，可以检测反应体系内nm～μm级范围的氨基酸浓度，有利于临床开展工作以及胃癌高发区的筛查使用。

技术领域

本发明属于医学检测领域，具体涉及一种核酸适配体-四链体的尿液氨基酸检测试剂盒及方法。

背景技术

代谢组学是继基因组学和蛋白质组学之后新发展起来的一门学科，它通过对人体内小分子代谢物进行精准定性定量，分析代谢物与人体生理病理变化的关系，研究疾病发生发展、寻找疾病生物标记物、预测疾病预后等。代谢组学在临床诊断上将有广阔的发展前景，主要应用方向有四个方面：在临床诊断中的应用、在病因与病理机制中的研究应用、在临床用药指导中的应用、在临床前动物模型筛选上的应用。

中国发明专利(CN201310556941.9)公开了通过气象色谱-质谱联用技术在胃癌患者尿液中发现了一组升高的小分子氨基酸可以作为胃癌筛查的标志物。尿液小分子生物标志物的新发现使得无创性胃癌筛查与诊断成为可能。然而，前期在胃癌患者尿液发现的氨基酸类属于小分子物质，需要依赖气相色谱/质谱(GC/MS)分析仪等高级精密仪器，此类仪器并非临床常规使用仪器，故难以在临床推广，更难以应用到胃癌高发区的人群普查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种核酸适配体-四链体的尿液氨基酸检测试剂盒及方法，以满足无创性胃癌普筛的需求。

本发明公开了一种核酸适配体-四链体的尿液氨基酸检测试剂盒，包括某一氨基酸特异性核酸适配体、DNA G四链体序列，其特征在于所述某一氨基酸特异性核酸适配体与DNA G四链体序列部分序列互补，在无目标氨基酸存在情况下，二者形成互补结合链，DNA G四链体序列无法形成G四链体。

本发明技术原理基于核酸适配体与靶标氨基酸之间的结合能力大于核酸适配体与互补DNA G四链体序列的相互作用力，将靶向某氨基酸的核酸适配体序列与上述DNA G四链体序列进行杂交；然后向反应体系内加入氨基酸；此时，核酸适配体序列与靶标氨基酸特异性结合，将前述结合的DNA G四链体序列释放出来；再向体系内加入血红素分子，血红素与DNA G四链体序列构成具有催化活性的DNAzyme，利用DNAzyme的HRP活性，可催化超敏化学发光液A、B混合液反应产生化学发光信号，或者催化DAB产生棕色呈色物质的特性，形成的化学发光光密度或者显色强度与靶标氨基酸分子含量成正比(图1)。

在一优选例中，所述氨基酸为丝氨酸。

在一优选例中，所述核酸适配体的核酸序列为Seq ID No.1所示。

在一优选例中，所述DNA G四链体序列的核酸序列为Seq ID No.2所示。

在一优选例中，所述尿液氨基酸检测试剂盒还包含超敏化学发光液或DAB显色液；

另一方面，本发明还公开了一种与丝氨酸特异性核酸适配体序列部分互补配对的DNA G四链体序列，其核酸序列为Seq ID No.2所示；

另一方面，本发明还公开了上述DNA G四链体序列在制备胃癌诊断试剂中用途。

另一方面，本发明还公开了一种尿液单一氨基酸的检测方法，包括下列步骤：

某一氨基酸核酸适配体和DNA G四链体序列杂交；

加入待检尿液样品；

加入血红素试剂；

加入超敏化学发光液或DAB显色液；