[发明专利]一种扩增髓系来源的抑制性细胞的方法

说明书

本发明提供了一种扩增髓系来源的抑制性细胞的方法，包括以下步骤：(1)获取小鼠骨髓细胞，使用完全培养基进行培养；(2)向步骤(1)所述培养体系中加入抑制c‑Myc基因表达的试剂，混匀后继续培养，获得髓系来源的抑制性细胞。本发明首次发现抑制c‑Myc基因的表达可促进MDSC的扩增，并建立了相应的方法学。通过本发明方法可在体外快速地安全地扩增出具有免疫抑制功能的MDSC，获得的MDSC可应用于自身免疫性疾病治疗等领域，对基于MDSC的细胞免疫治疗具有重要的价值。

技术领域

本发明属于免疫学和细胞生物学技术领域，具体涉及一种扩增髓系来源的抑制性细胞的方法。

背景技术

髓系来源的抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSC)是在某些病理情况下，因髓系细胞分化障碍所产生的未成熟髓系细胞及髓系祖细胞的集合。在正常状态下，髓系祖细胞及未成熟髓系细胞(IMCs)是骨髓中髓系细胞分化过程的中间环节，这些细胞会最终分化为成熟的巨噬细胞、粒细胞或树突状细胞。然而，在肿瘤、感染和炎症等病理情况下，髓系细胞分化过程受阻，造成处于不同分化阶段的髓系祖细胞及未成熟髓系细胞增多，并获得免疫抑制功能，即为MDSC。MDSC具有强大的免疫抑制功能，其可以诱导调节性T细胞(Treg)产生、抑制T细胞增殖、阻止T细胞的迁移、促进T细胞凋亡、抑制NK细胞、巨噬细胞、树突状细胞以及B细胞等。

MDSC被认为是免疫学领域的十大进展之一，其可作为新的免疫治疗靶点。因此，开发一种快速地特异性扩增MDSC的方法对基于MDSC的细胞免疫治疗具有重要的意义。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种扩增髓系来源的抑制性细胞的方法，所述方法操作简单，可在体外快速扩增获得具有免疫抑制功能的MDSC。

具体技术方案为：

一种扩增髓系来源的抑制性细胞的方法，包括以下步骤：

(1)获取小鼠骨髓细胞，使用完全培养基进行培养；

(2)向步骤(1)所述培养体系中加入抑制c-Myc基因表达的试剂，混匀后继续培养，获得髓系来源的抑制性细胞。

在其中一些实施例中，步骤(1)所述培养体系中小鼠骨髓细胞的密度为1-2.2×10⁶/ml。

在其中一些实施例中，步骤(1)所述完全培养基为包含以下浓度组分的RPMI 1640培养基：10-15v/v％FBS、45-55mMβ-ME、8-12ng/ml IL-6、15-25ng/ml GM-CSF。

在其中一些实施例中，所述完全培养基中还含有抗生素。

在其中一些实施例中，步骤(2)中待小鼠骨髓细胞培养12～24h再加入抑制c-Myc基因表达的试剂。

在其中一些实施例中，步骤(2)中加入抑制c-Myc基因表达的试剂，混匀后继续培养5-8天，获得髓系来源的抑制性细胞。

在其中一些实施例中，所述抑制c-Myc基因表达的试剂选自c-Myc基因抑制剂、shRNA、siRNA中的至少一种。

在其中一些实施例中，所述c-Myc基因抑制剂为10074-G5。

在其中一些实施例中，所述shRNA和siRNA针对c-Myc基因序列设计，可特异性抑制c-Myc基因的表达。

在其中一些实施例中，所述10074-G5在培养体系中的浓度为5-25μM。

在其中一些实施例中，优选所述10074-G5在培养体系中的浓度为5-15μM。

本发明还提供了抑制c-Myc基因表达的试剂在制备扩增髓系来源的抑制性细胞的试剂盒中的用途。