[发明专利]一种PCV2型杆状病毒、猪肺炎支原体、猪流感病毒、副猪嗜血杆菌四联灭活疫苗

权利要求书

1.一种PCV2型杆状病毒、猪肺炎支原体、猪流感病毒、副猪嗜血杆菌四联灭活疫苗，其特征在于，所述疫苗含有灭活的PCV2型CAP蛋白抗原、灭活的猪肺炎支原体抗原、灭活的猪流感病毒抗原、灭活的副猪嗜血杆菌抗原，以及，疫苗佐剂；其中，

所述的PCV2型CAP蛋白抗原为参照PCV2a和PCV2b分离株，在保持氨基酸不变的前提下，经人工合成密码子优化，将密码子改造为昆虫细胞杆状病毒表达系统偏嗜密码子的PCV2ORF2序列，并在序列两端引入EcoRI和XhoI酶切位点，通过双酶切插入pF astBac1转移载体中，经克隆、转染分别获得重组杆状病毒后，经感染SF9或High Five细胞高效表达的CAP蛋白抗原。

2.根据权利要求1所述的四联灭活疫苗，其特征在于，所述PCV2型CAP蛋白抗原包括PCV2a型CAP蛋白和PCV2b型CAP蛋白；

所述PCV2a型CAP蛋白的编码基因具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述PCV2a型CAP蛋白具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；

所述PCV2b型CAP蛋白的编码基因具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，所述PCV2b型CAP蛋白具有如SEQ ID No.4所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的四联灭活疫苗，其特征在于，所述猪肺炎支原体抗原为保藏编号为CGMCC NO.4545的猪肺炎支原体DJ-166病毒株，经改良CH培养基增殖、浓缩、纯化并灭活得到的猪肺炎支原体抗原。

4.根据权利要求3所述的四联灭活疫苗，其特征在于，所述猪流感病毒抗原为猪流感病毒H1N1亚型病毒株经增殖、浓缩、纯化并灭活得到的猪流感病毒H1N1亚型抗原。

5.根据权利要求4所述的四联灭活疫苗，其特征在于，所述副猪嗜血杆菌抗原血清包括分别以4型JS01株、5型FJ04株和13型HN01株经增殖、浓缩、纯化并灭活得到的副猪嗜血杆菌4型、5型和13型抗原。

6.根据权利要求1-5任一项所述的四联灭活疫苗，其特征在于，所述疫苗中：

所述PCV2型杆状病毒表达的Cap蛋白含量≥8µg/头份；

所述猪肺炎支原体抗原含量≥80µg/头份；

所述猪流感病毒HA≥7log2/头份；

所述副猪嗜血杆菌血清4型、5型和13型抗原含量均≥1.0×10⁸CFU/头份。

7.根据权利要求6所述的四联灭活疫苗，其特征在于，所述的疫苗佐剂包括铝盐佐剂、矿物油佐剂或水溶性佐剂。

8.一种制备权利要求1-7任一项所述PCV2型杆状病毒、猪肺炎支原体、猪流感病毒、副猪嗜血杆菌四联灭活疫苗的方法，其特征在于，包括将所述PCV2型CAP蛋白抗原、所述猪肺炎支原体抗原、所述猪流感病毒抗原和所述副猪嗜血杆菌抗原血清分别进行灭活浓缩的步骤，并按照选定的配比与所述疫苗佐剂进行混合的步骤。