[发明专利]一种利用微生物和植物联合固化道路边坡土壤的方法

权利要求书

1.一种利用微生物和植物联合固化道路边坡土壤的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(a)采集道路边坡土壤样品，经富集、纯化、筛选得到产脲酶微生物；(b)从道路边坡土壤中筛选出具有固土能力的植物；(c)将步骤(a)筛选得到的产脲酶微生物接种到步骤(b)筛选得到的固土植物根际，然后将固土植物种植在待处理道路边坡土壤中，联合培养即可；步骤(a)得到的产脲酶微生物在接种至固土植物根际联合培养前还需要再次筛选，筛选指标为是否具有促进植物生长能力以及是否具有诱导碳酸钙沉淀能力；其中是否具有促进植物生长能力的筛选过程具体如下：将步骤(a)得到的产脲酶微生物分别接种到溶磷液体培养基、解钾液体培养基、无氮固体培养基中于28-35℃下培养，取样检测培养期内微生物菌种的溶磷、解钾、固氮能力，筛选出目标产脲酶微生物；是否具有诱导碳酸钙沉淀能力的筛选过程具体如下：将氯化钙、尿素混合后加水制成胶结液，将筛选出的具有促进植物生长能力的菌液与胶结液混合，所得混合液置于28-35℃下静置恒温培养，取样检测样品中的碳酸钙沉淀量，确定出目标产脲酶微生物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(a)具体过程如下：将采集到的土壤样品与无菌水混合制成混悬液，过滤后取滤液上清液涂布于LB固体培养基上，28-35℃下倒置恒温培养，得到不同形态的单菌落；对各个单菌落分别划线，并再次接种到LB固体培养基中于同样条件下培养；重复划线纯化培养2-3次，直至获得较纯的菌株；将纯化后的微生物菌株接种至尿素琼脂培养基中，28-35℃下倒置恒温培养，选择使尿素琼脂培养基变红的菌株确定为产脲酶微生物。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述LB固体培养基按照重量份数计的配方为：蛋白胨8-10份，酵母浸粉3-5份，NaCl 8-10份，琼脂15-25份，蒸馏水1000份，pH为6-7；所述尿素琼脂培养基按照重量份数计的配方为：尿素10-20份，NaCl 5-8份，KH₂PO₄ 2-5份，蛋白胨0.5-1.5份，酚红0.01-0.02份，琼脂15-25份，蒸馏水1000份，pH为6-7。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：筛选是否具有促进植物生长能力的培养过程中，两种液体培养基的搅拌速度为120-170r/min，恒温振荡培养时间为5-9天，无氮固体培养基倒置恒温培养时间为2-4天。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述溶磷液体培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖8-10份，酵母浸粉0.3-0.5份，(NH₄)₂SO₄ 0.3-0.5份，KCl0.1-0.3份，MgSO₄·7H₂O0.05-0.15份，CaCl₂ 0.5-1.5份,FeSO₄·7H₂O 0.02-0.04份，Ca₃(PO₄)₂ 3-5份，蒸馏水1000份，pH为6-7；所述解钾液体培养基按照重量份数计的配方为：蔗糖8-10份，MgSO₄·7H₂O0.3-0.5份，(NH₄)₂SO₄ 0.1-0.3份，NaCl 0.05-0.15份，CaCO₃ 0.05-0.15份，钾长石粉3-5份，蒸馏水1000份，pH为6-7；所述无氮固体培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖8-10份，K₂HPO₄·3H₂O 0.5-0.8份，NaCl 0.1-0.3份，CaCO₃ 0.5-1.5份，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.3份，琼脂15-25份，蒸馏水1000份，pH为6-7。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：氯化钙、尿素混合时的质量比为1-2.5:1，胶结液的浓度范围为0.125-2mol/L，菌液与胶结液混合时的体积比为1:1-4。