[发明专利]一种基于苯酚测定的地龙注射液检测方法

说明书

本发明提供了一种基于苯酚测定的地龙注射液检测方法，采用液相色谱法将地龙注射液中的苯酚分离后在270nm处进行测定；采用的色谱柱固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，洗脱方式为梯度洗脱；流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为20mM磷酸氢二铵，流动相B为40％乙腈。将苯酚从地龙注射液中分离后测定，检测结果线性关系好，检测精密度高、稳定性好、重复性好、耐用性好，操作简便、稳定可靠。根据苯酚测定结果判断地龙注射液中的苯酚添加量是否符合产品标准，进而可以有效地控制地龙注射液的成品质量，保证用药安全。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其是指一种基于苯酚测定的地龙注射液检测方法。

背景技术

地龙注射液含有核苷、氨基酸、蛋白质及多肽、脂类、酶类及微量元素等多种成分，具有平喘止咳、降压等功效，可用于支气管哮喘所致的咳嗽、喘息等。苯酚作为抑菌剂加入。

次黄嘌呤和含氮化合物是地龙注射液平喘止咳的主要活性成分，现行质量标准含量测定部分仅包括氮测定法测总氮量、滴定法测氨基氮以及薄层色谱法测缬氨酸含量。

苯酚作为抑菌剂，有一定的毒性和腐蚀性，现行质量标准没有对苯酚进行检查和含量测定，《中国药典》2020年版四部中苯酚的测定方法是氧化还原滴定法，而且是回滴法，存在实验操作繁琐、苯酚易氧化、干扰因素多等弊端。潘云志在《医药导报》2013年第32卷第4期的“反相高效液相色谱法测定地龙注射液中苯酚含量”公开了一种测定地龙注射液中苯酚含量的方法，该法以甲醇-水(60:40)为流动相，虽然苯酚在浓度范围内线性关系良好，平均回收率99.46％，RSD＝0.25％(n＝9)，但该条件下核苷类成分无法完全分离，结果可靠性低。

为了有效控制地龙注射液成品质量，减少用药安全隐患，新方法应当能够在测定有效成分的同时，还检测苯酚的含量，为地龙注射液质量综合控制提供了可靠的实验依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：将苯酚从地龙注射液中分离后测定，进而控制地龙注射液的质量。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种基于苯酚测定的地龙注射液检测方法，采用液相色谱法将地龙注射液中的苯酚分离后在270nm处进行测定；采用的色谱柱固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，洗脱方式为梯度洗脱；流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为20mM磷酸氢二铵，流动相B为40％乙腈；根据苯酚含量测定结果监控地龙注射液的质量。

进一步地，所述液相色谱法还同时将地龙注射液中的次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷分别分离，所述次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷均在248nm处进行测定；还分别根据次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷的含量测定结果监控地龙注射液的质量。

进一步地，所述梯度洗脱的洗脱程序为：

0min，流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0；

15min，流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0；

30min，流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％；

31min，流动相A的体积分数为20％，流动相B的体积分数为80％；

45min，流动相A的体积分数为5％，流动相B的体积分数为95％；

46min，流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0；

60min，流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0；

流速为1.0mL·min^-1。

进一步地，所述液相色谱法中，样品处理时采用的溶剂为20mM磷酸氢二铵。