[发明专利]一种组织保存液及其应用

说明书

本发明提供一种组织保存液及其应用。所述组织保存液包括基础培养液和添加因子；所述添加因子至少包括以下终浓度的组分：N‑acetylcysteine，0.2‑5μM；吲哚‑3‑乳酸：100‑1000μM；Y‑27632 10‑100μM；GDF11 10‑100ng/ml；青霉素链霉素混合液，1‑5×；Primocin，0.5‑5mg/ml。该组织保存液应用在离体组织进行原代培养前保存中。保存方法包括：将组织离体后完全浸入上述的组织保存液中，于2～8℃保存。本发明的组织保存液对正常组织在离体后的有效保存期超过12小时，肿瘤组织及其细胞在离体后的有效保存期超过48小时，并且经过长时间保存的组织仍然能保持较高的细胞活力并保持细胞发育特征，显著提高原代细胞培养成功率。此外，本发明的组织保存液对于需要较长时间保存的原代培养标本，尤其是珍贵的临床标本具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种组织保存液及其应用。

背景技术

原代培养是重要的研究方法，包括贴壁培养、悬浮培养、3D培养等多种方法。但是原代培养的成功率与来源组织样本活性具有极大的相关性。但由于组织离体后，受到多种因素影响导致细胞活性降低甚至死亡，使得原代培养的预处理过程中无法获得足量具有活性的细胞，进而导致培养失败。例如，细胞离体后由于与体内其他细胞或细胞外机制的接触的丧失，诱导相关凋亡机制的调控，造成失巢凋亡。此外，类器官在离体后，由于失去血供而导致细胞缺氧，造成细胞代谢异常，进而引起细胞凋亡。

人源样本离体后，往往需要在短时间内进行处理及培养以提高成功率，一旦样本立体时间超过4小时，就容易导致培养失败。目前的细胞保存体系主要分为含血清与无血清两种，其中含血清保存液由于血清成分的差异，其保存效果具有不稳定性，且血清中的某些细胞因子会导致细胞的分化，改变原代细胞的发育状态，导致培养后的细胞与来源组织具有较大差异，失去来源个体的代表性。无血清培养基存在体系简单(以基础培养基为主)，无法避免失巢凋亡，组织样本保存时间短等特征。综上，目前的细胞保存体系无法较长期地保留细胞活性与来源组织的特征，成为原代细胞培养成功的重要障碍。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提供一种组织保存液及其应用以解决上述问题。本发明的技术方案为：

第一个方面，本发明提供一种组织保存液，包括基础培养液和添加因子；所述添加因子至少包括以下终浓度的组分：N-acetylcysteine，0.2-5μM；吲哚-3-乳酸：100-1000μM；Y-27632 10-100μM；GDF11 10-100ng/ml；青霉素链霉素混合液，1-5×；Primocin，0.5-5mg/ml。

优选地，所述添加因子还包括以下终浓度的组分：EGF，10-100ng/ml；CHIR99021，1-10μM。

优选地，所述基础培养基为Advanced DMEM/F12培养基。

进一步地，所述组织保存液的制备方法为：将添加因子加入到基础培养基中混合均匀即得。

第二个方面，本发明提供上述组织保存液在对离体组织进行原代培养前保存中的应用。

进一步地，所述离体组织包括肿瘤组织及其细胞与常规组织。

第三个方面，本发明提供一种离体组织的保存方法，包括：将组织离体后完全浸入上述的组织保存液中，于2～8℃保存。

进一步地，所述保存方法中，对常规组织的有效保存时间达到12h以上，对肿瘤组织及其细胞的有效保存时间达到48h以上。

本发明的有益效果是：