[发明专利]一种用于检测犬呼吸多重病原体的核酸组合物及其试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于检测犬呼吸多重病原体的核酸组合物，其特征在于，其包括：用于检测犬副流感病毒的第一试剂，用于检测犬瘟热病毒的第二试剂、用于检测犬腺病毒2型的第三试剂中的任意1种或几种的组合；

所述第一试剂包括序列如SEQ ID No.1～2所示的引物对1和/或序列如SEQ ID No.3所示的探针1；

所述第二试剂包括序列如SEQ ID No.4～5所示的引物对2和/或序列如SEQ ID No.6所示的探针2；

所述第三试剂包括序列如SEQ ID No.7～8所示的引物对3和/或序列如SEQ ID No.9所示的探针3。

2.根据权利要求1所述的用于检测犬呼吸多重病原体的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物还包括：用于检测支气管败血波氏杆菌的第四试剂；所述第四试剂包括序列如SEQ ID No.10～11所示的引物对4和/或序列如SEQ ID No.12所示的探针4。

3.根据权利要求1所述的用于检测犬呼吸多重病原体的核酸组合物，其特征在于，所述探针1～4序列的5’端均标记有荧光报告基团，3’端均标记有荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的用于检测犬呼吸多重病原体的核酸组合物，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM、VIC、HEX、CY3、NED、TXR、ROX、CY5中的任意一种，荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2、BHQ3、QSY中的任意一种。

5.一种用于检测犬呼吸多重病原体的试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1～4任一项所述的核酸组合物。

6.根据权利要求5所述的用于检测犬呼吸多重病原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR检测试剂。

7.根据权利要求6所述的用于检测犬呼吸多重病原体的试剂盒，其特征在于，所述PCR检测试剂选自：逆转录酶、Taq DNA聚合酶、dNTP和MgCl₂中的至少一种。

8.一种用于检测检测犬呼吸多重病原体的方法，其特征在于，其包括采用如权利要求1～4任一项所述的用于检测犬呼吸多重病原体的核酸组合物、或如权利要求5～7任一项所述的用于检测犬呼吸多重病原体的试剂盒对待测样品进行检测；

所述方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。

9.根据权利要求8所述的用于检测检测犬呼吸多重病原体的方法，其特征在于，所述检测为PCR检测，当包括引物对1～引物对4时，所述引物对1～引物对4的工作浓度均为0.2～0.4μM；

当包括探针1～探针4时，所述探针1～探针4的工作浓度均为0.4～0.6μM。

10.根据权利要求9所述的用于检测检测犬呼吸多重病原体的方法，其特征在于，所述PCR检测的反应条件为：48～52℃10～20min；93～97℃2～3min；93～97℃5～10s；58～62℃20～30s；共38～42个循环。