[发明专利]一种免疫磁珠及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种制备免疫磁珠的方法，其特征在于，包括如下步骤：

磁珠活化步骤：将氨基磁珠和3-(2-吡啶二硫基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯反应，得到引入吡啶二硫基团的氨基磁珠；

还原反应步骤：引入吡啶二硫基团的氨基磁珠和二硫苏糖醇反应，得到巯基磁珠；

抗原活化步骤：将三碘甲状腺原氨酸抗原和甲状腺素抗原分别和3-(2-吡啶二硫基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯反应，得到引入吡啶二硫基团的三碘甲状腺原氨酸抗原和引入吡啶二硫基团的甲状腺素抗原；

免疫磁珠制备步骤：将引入吡啶二硫基团的三碘甲状腺原氨酸抗原、引入吡啶二硫基团的甲状腺素抗原和巯基磁珠反应，得到免疫磁珠；

在所述抗原活化步骤中，将抗原溶解于抗原活化缓冲液中，然后与活性剂混合发生反应，反应条件为：温度为20～30℃、转速为50～70rpm下，反应15～60min；所述抗原在抗原活化缓冲液中的浓度为0.5～5mg/mL，所述活化剂在反应液中的浓度为5～100mM；

在所述免疫磁珠制备步骤中，取氨基磁珠用磁珠活化缓冲液清洗，并用磁珠活化缓冲液重悬，然后与活性剂混合发生反应，反应条件为：温度为20～30℃、转速为50～70rpm下，反应15～60min；引入吡啶二硫基团的抗原和巯基磁珠的添加比例为：1mg巯基磁珠对应10～80nmol的引入吡啶二硫基团的抗原；所述氨基磁珠在磁珠活化缓冲液中的浓度为5～30mg/mL，所述活化剂在反应液中的浓度为5～100mM；

在所述还原反应步骤中，取引入吡啶二硫基团的氨基磁珠用磁珠偶联液清洗，并用磁珠偶联液重悬，与活性剂混合发生反应，反应条件为：温度为20～30℃、转速为50～70rpm下，反应15～60min；所述引入吡啶二硫基团的氨基磁珠在磁珠偶联液中的浓度为5～30mg/mL，所述活化剂在反应液中的浓度为5～100mM。

2.一种免疫磁珠，其特征在于，所述免疫磁珠是使用权利要求1所述的方法制备得到的。

3.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒含有权利要求2所述的免疫磁珠。

4.权利要求2所述的免疫磁珠或权利要求3所述的检测试剂盒在检测可与免疫磁珠中的抗原或检测试剂盒含有的免疫磁珠中的抗原特异性结合的物质的浓度中的应用，其特征在于，所述抗原为三碘甲状腺原氨酸抗原或甲状腺素抗原中的一种或一种以上，所述可与抗原特异性结合的靶物质为甲状腺素、总三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素或游离三碘甲状腺原氨酸中的一种或一种以上。